目的:本課題研究是以皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院弋磯山醫(yī)院神經(jīng)外科和南京大學(xué)附屬醫(yī)院東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)外科收治的腦膠質(zhì)瘤患者的手術(shù)標(biāo)本為研究對(duì)象,旨在探討轉(zhuǎn)錄因子人叉頭框蛋白O4（FOXO4）和g0/g1轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)蛋白3（FOSB）在膠質(zhì)瘤中的表達(dá),并進(jìn)一步通過對(duì)體外膠質(zhì)瘤細(xì)胞系（GBM）中FOXO4和FOSB的調(diào)控,觀察兩者對(duì)惡性細(xì)胞增殖和遷移表型的影響,尋找FOXO4和FOSB在膠質(zhì)瘤中的作用,為臨床上了解和治療膠質(zhì)瘤積累更多有價(jià)值的相關(guān)基礎(chǔ)資料。方法:首先收集臨床上確診的腦膠質(zhì)瘤病人在手術(shù)中切除的腫瘤組織標(biāo)本,包括低級(jí)別膠質(zhì)瘤標(biāo)本（病理分級(jí)為WHOⅠ級(jí)和WHOⅡ級(jí)）和高級(jí)別膠質(zhì)瘤標(biāo)本（病理分級(jí)為WHOⅢ級(jí)和WHOⅣ級(jí)）,再以正常腦組織標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。采用Western Blot和免疫組化染色法檢測FOXO4和FOSB在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤和正常腦組織中的表達(dá),并統(tǒng)計(jì)分析是否有差異。然后,在體外細(xì)胞系的培養(yǎng)中進(jìn)一步驗(yàn)證。運(yùn)用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）和Western Blot檢測正常人星形膠質(zhì)細(xì)胞系（HA）和五種膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）細(xì)胞系（U251、U118、U87、T98G、... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各級(jí)別星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織FOXO4的表達(dá)，標(biāo)尺=30μm(免疫組化法，×400)箭頭所Ⅰ-ⅣFOXO420131-20181

21結(jié)果1FOXO4在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及作用機(jī)制1.1FOXO4在人腦星型細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)檢測FOXO4在人腦星型細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)（星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤為人腦膠質(zhì)瘤中最常見的一種類型），所有星型細(xì)胞瘤患者術(shù)前均未接受任何抗腫瘤治療，術(shù)后病理按WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，用瘤周組織作為對(duì)照組。免疫組化學(xué)結(jié)果顯示，腫瘤組織FOXO4的陽性表達(dá)率比瘤周正常腦組織低（圖1）。隨機(jī)在左上角的瘤周陽性表達(dá)的細(xì)胞中選取四個(gè)細(xì)胞，測得灰度值平均值為88.72。在右下角的腫瘤組織陽性表達(dá)的細(xì)胞中選取四個(gè)細(xì)胞，測量灰度值平均值為129.75。圖1星型細(xì)胞瘤中FOXO4表達(dá)（免疫組化法×200）右側(cè)箭頭為FOXO4在腫瘤組織中陽性表達(dá)，左側(cè)箭頭為FOXO4在瘤周組織中的陽性表達(dá)。各級(jí)別膠質(zhì)瘤免疫組化結(jié)果顯示，Ⅰ級(jí)星形細(xì)胞瘤的FOXO4陽性表達(dá)高于其他三種級(jí)別（Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)），且Ⅱ級(jí)星型細(xì)胞瘤組織FOXO4陽性表達(dá)高于Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)星型細(xì)胞瘤（P＜0.05）。Ⅲ級(jí)星型細(xì)胞瘤組織FOXO4陽性表達(dá)高于Ⅳ級(jí)星型細(xì)胞瘤（P＜0.05）（圖2、表1）。免疫熒光檢測結(jié)果顯示，F(xiàn)OXO4的陽性表達(dá)強(qiáng)度隨著腫瘤級(jí)別的升高而降低，即低級(jí)別的星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤的FOXO4陽性表達(dá)率高于高級(jí)別星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞。通過免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)FOXO4的表達(dá)定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核（圖3）。圖2各級(jí)別星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織FOXO4的表達(dá)，標(biāo)尺=30μm(免疫組化法，×400)箭頭所示為Ⅰ-Ⅳ級(jí)星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中FOXO4陽性表達(dá)細(xì)胞（2013年1月-2018年1月行膠質(zhì)瘤手術(shù)切除的星型膠質(zhì)瘤標(biāo)本27例，Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)分別是5例、8例、10例、4例）。

22表1各級(jí)別星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織FOXO4陽性細(xì)胞的平均灰度值(sx)組別n灰度值FPWHOⅠ565.78±5.25aWHOⅡ8105.50±5.61b86.8240.000WHOⅢ10153.20±1.90cWHOⅣ4172.40±1.45d注：多組間兩兩比較。符號(hào)不同表示P＜0.05。圖3星型細(xì)胞瘤組織FOXO4陽性表達(dá)（免疫熒光×400）1.2膠質(zhì)瘤組織和GBM細(xì)胞中FOXO4在mRNA和蛋白質(zhì)水平的下調(diào)我們首先使用qRT-PCR和WesternBlot分別檢測了6個(gè)GBM組織、6個(gè)WHOⅡ級(jí)腫瘤組織和5個(gè)正常腦組織中FOXO4mRNA和蛋白的表達(dá)。WesternBlot結(jié)果顯示，隨著腫瘤病理分級(jí)的增加，GBM中FOXO4的表達(dá)明顯降低，即低級(jí)別膠質(zhì)瘤中FOXO4的表達(dá)明顯低于正常腦組織（P＜0.01；圖4A、B）。qRT-PCR分析結(jié)果顯示，mRNA的水平，高級(jí)別膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中FOXO4表達(dá)比正常腦組織標(biāo)本低約三倍（圖4C）。此外，在體外GBM細(xì)胞中，F(xiàn)OXO4mRNA水平也明顯低于HA細(xì)胞（P＜0.01；圖4D）。這一結(jié)果顯示體內(nèi)外FOXO4的在膠質(zhì)瘤組織和膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)趨勢相同，都高于正常組織和正常膠質(zhì)細(xì)胞系。


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