目的通過(guò)原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元,運(yùn)用Toll樣受體4（toll-like receptor 4,TLR4）的天然配體脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）或其他不同的工具藥,以激活或阻斷TLR4的作用,探討海馬神經(jīng)元中是否存在TLR4介導(dǎo)的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信號(hào)通路以及該信號(hào)通路的激活在神經(jīng)炎癥中的作用。揭示海馬神經(jīng)元中存在TLR4介導(dǎo)的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信號(hào)通路以及該信號(hào)通路的激活參與了神經(jīng)炎癥反應(yīng)。為海馬神經(jīng)元TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通路在神經(jīng)炎癥中的作用提供了更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用原代培養(yǎng)7 d的新生大鼠海馬神經(jīng)元,細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)法鑒定海馬神經(jīng)元的純度。應(yīng)用TLR4的配體LPS、TLR4抗體或其他工具藥預(yù)處理海馬神經(jīng)元,以激活或阻斷TLR4信號(hào)通路的作用。用Western Blot檢測(cè)PTEN、AKT及其磷酸化水平;細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)法觀察海馬神經(jīng)元中核因子κB/P65（nuclear factor-κB/P65,NF-κB/P65）核易位情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)（Enzyme-linked immunosorbent as... 

【文章來(lái)源】：南通大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
扉頁(yè)摘要
Abstract
第一章 緒論
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 動(dòng)物
        2.1.2 儀器
        2.1.3 藥物與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)
        2.2.2 海馬神經(jīng)元的純度鑒定
        2.2.3 Western blot檢測(cè)LPS刺激海馬神經(jīng)元PTEN、AKT蛋白及磷酸化蛋白的表達(dá)變化
        2.2.4 細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)NF-κB/P65的核易位情況
        2.2.5 RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)LPS刺激及TLR4抗體、bpV（pic）和PDTC預(yù)處理后海馬神經(jīng)元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表達(dá)變化
        2.2.6 RT-qPCR方法操作步驟
        2.2.7 ELISA法檢測(cè)海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
第三章 結(jié)果
    3.1 原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元的形態(tài)
    3.2 海馬神經(jīng)元的純度鑒定
    3.3 Western blot檢測(cè)不同濃度的LPS刺激 8、24、48 h后海馬神經(jīng)元PTEN、AKT蛋白的表達(dá)變化
        3.3.1 不同濃度的LPS刺激海馬神經(jīng)元 8 h后PTEN、AKT蛋白表達(dá)變化
        3.3.2 不同濃度的LPS刺激海馬神經(jīng)元 24 h后PTEN、AKT蛋白表達(dá)變化
        3.3.3 不同濃度的LPS刺激海馬神經(jīng)元 48 h后PTEN、AKT蛋白表達(dá)變化
    3.4 Western Blot檢測(cè)LPS剌激后對(duì)海馬神經(jīng)元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表達(dá)的影響
    3.5 Western blot檢測(cè)TLR4抗體阻斷后對(duì)海馬神經(jīng)元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表達(dá)的影響
    3.6 Western blot檢測(cè)不同濃度的PTEN抑制劑bpV(pic)對(duì)海馬神經(jīng)元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表達(dá)的影響
    3.7 細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)大鼠海馬神經(jīng)元NF-κB/p65的核易位情況
    3.8 RT-qPCR方法檢測(cè)LPS刺激海馬神經(jīng)元不同時(shí)間后PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表達(dá)變化
        3.8.1 LPS刺激不同時(shí)間PTEN、AKT mRNA表達(dá)變化
        3.8.2 LPS刺激不同時(shí)間TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)變化
    3.9 RT-qPCR方法檢測(cè)TLR4抗體阻斷后海馬神經(jīng)元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表達(dá)變化
    3.10 PTEN的抑制劑bpV(pic)預(yù)處理對(duì)海馬神經(jīng)元TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)的影響
    3.11 NF-κB的拮抗劑PDTC預(yù)處理對(duì)海馬神經(jīng)元TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)的影響
    3.12 ELISA法檢測(cè)海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
        3.12.1 ELISA法檢測(cè)LPS對(duì)海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清中TNF-α 和IL-1β水平的影響
        3.12.2 ELISA法測(cè)定TLR4抗體、PTEN抑制劑bpV（pic）和NF-κB拮抗劑PDTC預(yù)處理后對(duì)海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-1β 水平的影響
第四章 討論
    4.1 海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)與純度鑒定
    4.2 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對(duì)PTEN、AKT mRNA和蛋白表達(dá)的影響
    4.3 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對(duì)PTEN、AKT蛋白及其磷酸化蛋白的影響
    4.4 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對(duì)NF-κB核易位的影響
    4.5 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對(duì)TNF-α 和IL-1β 的影響
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮寫(xiě)詞表
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
在攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文與參加的項(xiàng)目
附錄：攻讀學(xué)位期間獲得的主要榮譽(yù)
致謝



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