目的通過原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元,運用Toll樣受體4（toll-like receptor 4,TLR4）的天然配體脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）或其他不同的工具藥,以激活或阻斷TLR4的作用,探討海馬神經(jīng)元中是否存在TLR4介導(dǎo)的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信號通路以及該信號通路的激活在神經(jīng)炎癥中的作用。揭示海馬神經(jīng)元中存在TLR4介導(dǎo)的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信號通路以及該信號通路的激活參與了神經(jīng)炎癥反應(yīng)。為海馬神經(jīng)元TLR4介導(dǎo)的信號通路在神經(jīng)炎癥中的作用提供了更多的實驗依據(jù)。方法采用原代培養(yǎng)7 d的新生大鼠海馬神經(jīng)元,細胞免疫熒光雙標法鑒定海馬神經(jīng)元的純度。應(yīng)用TLR4的配體LPS、TLR4抗體或其他工具藥預(yù)處理海馬神經(jīng)元,以激活或阻斷TLR4信號通路的作用。用Western Blot檢測PTEN、AKT及其磷酸化水平;細胞免疫熒光雙標法觀察海馬神經(jīng)元中核因子κB/P65（nuclear factor-κB/P65,NF-κB/P65）核易位情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)（Enzyme-linked immunosorbent as... 

【文章來源】：南通大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
扉頁摘要
Abstract
第一章 緒論
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 動物
        2.1.2 儀器
        2.1.3 藥物與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)
        2.2.2 海馬神經(jīng)元的純度鑒定
        2.2.3 Western blot檢測LPS刺激海馬神經(jīng)元PTEN、AKT蛋白及磷酸化蛋白的表達變化
        2.2.4 細胞免疫熒光雙標法檢測NF-κB/P65的核易位情況
        2.2.5 RT-qPCR技術(shù)檢測LPS刺激及TLR4抗體、bpV（pic）和PDTC預(yù)處理后海馬神經(jīng)元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表達變化
        2.2.6 RT-qPCR方法操作步驟
        2.2.7 ELISA法檢測海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析
第三章 結(jié)果
    3.1 原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元的形態(tài)
    3.2 海馬神經(jīng)元的純度鑒定
    3.3 Western blot檢測不同濃度的LPS刺激 8、24、48 h后海馬神經(jīng)元PTEN、AKT蛋白的表達變化
        3.3.1 不同濃度的LPS刺激海馬神經(jīng)元 8 h后PTEN、AKT蛋白表達變化
        3.3.2 不同濃度的LPS刺激海馬神經(jīng)元 24 h后PTEN、AKT蛋白表達變化
        3.3.3 不同濃度的LPS刺激海馬神經(jīng)元 48 h后PTEN、AKT蛋白表達變化
    3.4 Western Blot檢測LPS剌激后對海馬神經(jīng)元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表達的影響
    3.5 Western blot檢測TLR4抗體阻斷后對海馬神經(jīng)元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表達的影響
    3.6 Western blot檢測不同濃度的PTEN抑制劑bpV(pic)對海馬神經(jīng)元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表達的影響
    3.7 細胞免疫熒光雙標法檢測大鼠海馬神經(jīng)元NF-κB/p65的核易位情況
    3.8 RT-qPCR方法檢測LPS刺激海馬神經(jīng)元不同時間后PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表達變化
        3.8.1 LPS刺激不同時間PTEN、AKT mRNA表達變化
        3.8.2 LPS刺激不同時間TNF-α、IL-1β mRNA表達變化
    3.9 RT-qPCR方法檢測TLR4抗體阻斷后海馬神經(jīng)元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表達變化
    3.10 PTEN的抑制劑bpV(pic)預(yù)處理對海馬神經(jīng)元TNF-α、IL-1β mRNA表達的影響
    3.11 NF-κB的拮抗劑PDTC預(yù)處理對海馬神經(jīng)元TNF-α、IL-1β mRNA表達的影響
    3.12 ELISA法檢測海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
        3.12.1 ELISA法檢測LPS對海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清中TNF-α 和IL-1β水平的影響
        3.12.2 ELISA法測定TLR4抗體、PTEN抑制劑bpV（pic）和NF-κB拮抗劑PDTC預(yù)處理后對海馬神經(jīng)元培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-1β 水平的影響
第四章 討論
    4.1 海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)與純度鑒定
    4.2 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對PTEN、AKT mRNA和蛋白表達的影響
    4.3 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對PTEN、AKT蛋白及其磷酸化蛋白的影響
    4.4 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對NF-κB核易位的影響
    4.5 LPS激活海馬神經(jīng)元TLR4對TNF-α 和IL-1β 的影響
第五章 結(jié)論
參考文獻
英文縮寫詞表
綜述
    綜述參考文獻
在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文與參加的項目
附錄：攻讀學(xué)位期間獲得的主要榮譽
致謝



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