周圍神經(jīng)損傷是臨床外科常見的疾病之一,其治療及功能恢復長期以來都是臨床醫(yī)生面臨的一項重要挑戰(zhàn)。目前臨床上自體神經(jīng)移植是周圍神經(jīng)缺損修復的“金標準”,但由于其存在來源受限、犧牲供區(qū)次要神經(jīng)功能等因素其臨床應用受到限制,因此人工神經(jīng)為臨床修復提供了一個新思路,成為目前周圍神經(jīng)損傷修復的研究熱點。近年來隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展,眾多的材料被應用于人工神經(jīng)的制備。蠶絲具有高韌性以及良好的生物相容性,是一種常見的組織工程材料。本課題組前期研究表明利用蠶絲纖維構(gòu)建的微通道人工神經(jīng)導管在引導和促進再生神經(jīng)纖維的生長方面有顯著的效果,但是其在體內(nèi)卻難以降解;在隨后的研究中發(fā)現(xiàn),在炎癥反應中的細胞吞噬作用是其在體內(nèi)降解的主要因素之一,同時在神經(jīng)損傷修復早期,適度的炎癥反應也有助于促進損傷神經(jīng)的修復。研究表明,當周圍神經(jīng)組織損傷后,炎癥反應隨即被觸發(fā),損傷處以及遠端全長神經(jīng)纖維發(fā)生瓦勒氏變性（Wallerian degeneration,WD）,在此過程中,巨噬細胞吞噬變性的組織碎片,為神經(jīng)再生掃除障礙,雪旺氏細胞增殖活化形成Büngner帶,并且分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子,促進軸突的再生。脂多糖（lipopolys... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

LPS對各組大鼠血細胞的影響

第3章脂多糖/蠶絲纖維/PLA復合人工神經(jīng)的制備與手術(shù)移植23其自然回縮后切除神經(jīng)形成10mm缺損。取各組人工神經(jīng)導管，以LPS組人工神經(jīng)為例（圖3.1），套接于神經(jīng)的斷端，8/0無創(chuàng)縫合線于神經(jīng)外膜與人工神經(jīng)管壁縫合。最后用2/0縫合線依次將肌肉、皮膚縫合，傷口處注射1mL雙抗以防感染。假手術(shù)組則只切開皮膚、鈍性分離肌肉組織暴露出坐骨神經(jīng)后不做任何處理，然后依次將肌肉、皮膚縫合。自體移植組則將切除的10mm坐骨神經(jīng)重新縫合。術(shù)后每組動物做好標記，分籠喂養(yǎng)。圖3.1人工神經(jīng)導管移植示意圖Figure3.1Schematicdiagramofartificialnerveconduitgraft3.2.6統(tǒng)計學分析采用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)結(jié)果均以平均值±標準差表示，多組間結(jié)果比較采用單因素方差分析，利用Duncan法進行多重比較，同一時間點上標不同字母表示差異顯著（P<0.05），同一時間點上標相同字母表示差異不顯著（P>0.05），用Origin9.0進行作圖。3.3結(jié)果與討論3.3.1脂多糖/蠶絲纖維/PLA復合人工神經(jīng)的形態(tài)如圖3.2所示，為了構(gòu)建人工神經(jīng)內(nèi)芯層，對蠶絲纖維進行一系列的處理。將生絲進行橫向冰凍切片，結(jié)果顯示，本研究所用生絲由絲膠（SE）和其包裹的單絲（SF）組成，平均每根生絲含18根單絲，單絲橫截面多呈三角形（圖3.2A），平均寬度為13μm。掃描電鏡下觀察生絲的結(jié)構(gòu)，清晰可見每根單絲表面均附著大量絲膠蛋白（圖3.2B）；利用碳酸氫鈉溶液脫絲膠后，單絲表面的絲膠蛋白全部被去除，即得不含絲膠蛋白的熟絲絲束（圖3.2C）；圖3.1D顯示，載LPS的海藻酸鈣凝膠均勻附著于每根單絲表面；圖3.2E顯示，PLA膜具有多孔結(jié)構(gòu)，其覆蓋在載LPS的海藻酸鈣凝膠熟絲絲束表面，一定程度上減緩了LPS的釋放速率。圖3.3顯示，人工神經(jīng)導管長12mm，內(nèi)徑約1.8mm，管壁厚?

西南大學碩士學位論文24圖3.2蠶絲纖維的處理A.生絲橫截面冰凍切片；B.生絲表面結(jié)構(gòu)（SEM）；C.熟絲表面結(jié)構(gòu)（SEM）D.載LPS海藻酸鈣熟絲表面結(jié)構(gòu)；E.PLA膜覆蓋載LPS海藻酸鈣熟絲表面結(jié)構(gòu)；SF，單絲；SE，絲膠；CA，海藻酸鈣Figure3.2TreatmentofsilkfibersA.Frozensectionofrawsilkcrosssection;B.Rawsilksurfacestructure(SEM);C.Thesurfacestructureofsilkfibers(SEM)D.SurfacestructureofLPS-loadedcalciumalginatesilkfibers;Surfacestructure;SF,monofilament;SE,sericin;CA,calciumalginate圖3.3LPS/蠶絲纖維/PLA復合人工神經(jīng)形態(tài)A.外部形態(tài)；B.橫截面；C.外表面（SEM）；D.內(nèi)部微通道橫截面（SEM）Figure3.3LPS/silkfiber/PLAcompositeartificialnervemorphologyA.Externalmorphology;B.Crosssection;C.Externalsurface(SEM);D.Internalmicrochannelcrosssection(SEM)3.3.2雪旺氏細胞的培養(yǎng)與鑒定細胞在原代培養(yǎng)的第3天，逐漸地從組織塊中脫離出來，開始貼壁增殖，并向周圍遷移生長。到第8天時，已有大量增殖、貼壁的細胞，細胞形狀大多呈長

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