發(fā)布時(shí)間：2021-12-02 13:10

　　近年來的研究表明,miRNA通常在轉(zhuǎn)錄后水平來調(diào)控基因的表達(dá),其在腫瘤組織中的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有至關(guān)重要的作用。在膠質(zhì)瘤的研究中,miRNA與SALL4的調(diào)控關(guān)系的研究較少,具有相同“種子區(qū)”的多個(gè)目標(biāo)miRNA共同調(diào)控SALL4也未見報(bào)道。為了探究miR-103、miR-195和mi R-15b的作用,我們采用MTT增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-103、miR-195和miR-15b可以顯著抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力。為了探討其抑制增殖的機(jī)制,我們采用PI/AnnexinV雙染色流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡,發(fā)現(xiàn)miR-103、miR-195和miR-15b可以誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡,且這3種miRNA存在競爭關(guān)系。同時(shí),我們也采用Transwell細(xì)胞小室實(shí)驗(yàn)檢測這3種miRNA對膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響。結(jié)果顯示,miR-103、miR-195和miR-15b可以在不同程度上抑制細(xì)胞的遷移和侵襲,并且共同轉(zhuǎn)染這3種miRNA的結(jié)果表明miR-103、miR-195和miR-15b存在競爭關(guān)系。我們用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)對mi R-103、miR-195和miR-15b在腦膠質(zhì)瘤... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題背景及研究的目的和意義
    1.2 SALL4基因國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及分析
        1.2.1 原癌基因SALL4簡介
        1.2.2 SALL4基因與腫瘤發(fā)生的關(guān)系
    1.3 miRNA研究現(xiàn)狀
        1.3.1 miRNA的作用機(jī)制
        1.3.2 miRNA與腫瘤
        1.3.3 miR-103/195/15b在腫瘤中的研究進(jìn)展
    1.4 主要研究內(nèi)容
    1.5 技術(shù)路線
第2章 材料方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.3 試劑配方
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.2.2 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測
        2.2.3 RT-PCR
        2.2.4 Western Blot
        2.2.5 MTT增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 細(xì)胞貼附依賴性生長實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 PI/Annexin V檢測細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 Transwell細(xì)胞侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 慢病毒包裝及感染
    2.3 分析軟件
第3章 miR-103/195/15b競爭性抑制增殖與遷移
    3.1 miR-103/195/15b抑制細(xì)胞增殖
        3.1.1 miR-103/195/15b在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的表達(dá)
        3.1.2 miR-103/195/15b過表達(dá)檢測
        3.1.3 miR-103/195/15b對增殖的影響
        3.1.4 miR-103/195/15b對凋亡的影響
    3.2 miR-103/195/15b抑制細(xì)胞遷移及侵襲
        3.2.1 miR-103/195/15b對細(xì)胞遷移的影響
        3.2.2 miR-103/195/15b對細(xì)胞侵襲的影響
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
第4章 miR-103/195/15b靶向調(diào)控SALL4的表達(dá)
    4.1 SALL4為miR-103/195/15b靶基因的確認(rèn)
        4.1.1 SALL4與miR-103/195/15b表達(dá)相關(guān)性分析
        4.1.2 靶基因的預(yù)測與鑒定
    4.2 SALL4促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移與侵襲
        4.2.1 慢病毒包裝并篩選SALL4高表達(dá)細(xì)胞系
        4.2.2 SALL4對腦膠質(zhì)瘤侵襲及遷移的影響
    4.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SALL4在疾病中的研究進(jìn)展[J]. 卜建設(shè),李寶艷,秦成路,廖蒔.  中外醫(yī)學(xué)研究. 2011(24)

博士論文
[1]中藥黃芩苷通過下調(diào)miR-294抑制小鼠D3胚胎干細(xì)胞增殖能力[D]. 王鍵.華中科技大學(xué) 2013



本文編號：3528506