髓系來源抑制細胞（Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）是一類未成熟,具有抑制性功能的細胞。研究發(fā)現(xiàn)MDSCs在腫瘤微環(huán)境中扮演重要角色。腫瘤來源的細胞因子和生長因子能夠促進MDSCs擴增或者活化,MDSCs則通過多種機制產(chǎn)生免疫耐受環(huán)境促進腫瘤生長。MDSCs是腫瘤免疫療法失敗的主要原因之一。針對MDSCs的靶向治療能夠減少免疫抑制作用,從而增強對免疫療法的反應。骨化三醇（Calcitriol）是維生素D3的活性形式,通過與維生素D受體（Vitamin D receptor,VDR）結合發(fā)揮生物學功能。骨化三醇除了調(diào)節(jié)鈣和磷穩(wěn)態(tài)之外,其還具有影響腫瘤生長和免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的作用。但是,骨化三醇對在膠質瘤及其微環(huán)境中MDSCs的作用仍然未知。首先,我們對C57BL/6J小鼠進行骨化三醇預處理,對照小鼠給與相同劑量的生理鹽水,兩周之后使用小鼠膠質瘤細胞（GL261）構建原位腫瘤模型,并記錄小鼠的生存時間,計算兩組荷瘤小鼠的生存率。結果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,注射骨化三醇的荷瘤小鼠生存時間明顯縮短（p<0.05）,腫瘤的面積也顯著增大（p<0.0... 

【文章來源】：長春理工大學吉林省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

腦組織單細胞CD4+和CD8a+圈門策略A.為流式細胞散點圖；B.根據(jù)FSC-A與FSC-H結合圈出單細胞；C.從圖b圈出的單細胞圈出CD45陽性細胞；D.從CD45陽性中分別圈出CD4和CD8a陽性細胞

魘較赴?跫觳餑宰櫓??⒃嗪凸?髓中MDSCs，CD4+和CD8a+的表達情況。另外，利用骨髓細胞分化實驗，檢測骨化三醇對MDSCs的作用。同時，進行了腫瘤組織的VDR檢測，以此探究骨化三醇通過與其受體結合對小鼠膠質瘤模型中MDSCs的作用。3.1GL261小鼠腫瘤模型的建立及分析首先，為了了解骨化三醇對GL261小鼠膠質瘤模型的作用。體內(nèi)實驗方案如圖3.1所示，我們把18只8周C57/BJ小鼠隨機分為兩組，進行骨化三醇預處理，一組注射骨化三醇組作為實驗組，另一組注射對照試劑作為對照組。兩周之后，原位移植GL261細胞到小鼠的顱內(nèi)。圖3.1體內(nèi)實驗方案3.1.1GL261膠質瘤模型的生存分析按照2.2.10實驗方法構建小鼠的GL261膠質瘤模型（圖3.2A），GL261細胞在小鼠的顱內(nèi)逐漸成瘤，隨著小鼠顱內(nèi)腫瘤的生長，荷瘤小鼠會出現(xiàn)明顯的發(fā)瘤特征，當小鼠出現(xiàn)明顯的弓背、食欲減退、行走不良并且體重急劇減輕（一般3天內(nèi)減少1g左右）即可定義為小鼠已經(jīng)開始發(fā)瘤。此時密切觀察小鼠行為特征以及體重變化，若小鼠體重每天持續(xù)下降（下降到18g）或者行動極其不便，則人為定義小鼠患瘤死亡。記錄18只小鼠的存活天數(shù)，并繪制小鼠的生存曲線。實驗結果如圖3.2B所示，與對照組相比，實驗組的小鼠生存時間顯著性減少（P<0.05）。因此，由小鼠的生存結果可知，骨化三醇能夠減少荷瘤小鼠的生存時間。

第三章實驗結果28圖3.2腫瘤模型的建立及生存分析A.將3×105個GL261小鼠膠質瘤細胞注射到小鼠的紋狀體內(nèi)；B.注射骨化三醇和對照試劑的荷瘤小鼠生存曲線（N=9，*P<0.05）3.1.2GL261腫瘤模型腦組織和脾臟分析由結果3.1.1可知骨化三醇縮短了荷瘤小鼠的生存時間。因此，我們觀察在同一時間點，注射骨化三醇和對照試劑的荷瘤小鼠，腦組織和脾臟的外觀以及重量的區(qū)別。按照2.2.10的方法構建同樣的小鼠膠質瘤模型，并且我們在種瘤18天之后，同時取出注射骨化三醇和對照試劑荷瘤小鼠的腦組織和脾臟，然后進行拍照和稱重。圖3.3GL261腫瘤模型腦組織和脾臟分析A．對照組和注射骨化三醇組荷瘤小鼠的腦組織；B.對照組和注射骨化三醇組荷瘤小鼠腦組織重量統(tǒng)計；C.對照組和注射骨化三醇組荷瘤小鼠的脾臟；D.對照組和注射骨化三醇組荷瘤小鼠的脾臟重量統(tǒng)計。（N=5，*P<0.05，ns無差異）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Protective links between vitamin D, inflammatory bowel disease and colon cancer[J]. Stacey Meeker,Audrey Seamons,Lillian Maggio-Price,Jisun Paik.  World Journal of Gastroenterology. 2016(03)



本文編號：3526126