膠質瘤是最常見的顱內腫瘤,發(fā)病率和復發(fā)率都很高、病人預后較差。目前,臨床上主要治療為手術切除病灶聯(lián)合術后放化療,但是,患者仍然難以達到長期存活。因此,為了研究膠質瘤的發(fā)生,發(fā)展的分子機制,尋找腦膠質瘤治療的新靶點,已成為近年來膠質瘤診治中的熱點之一。人類PIM1基因編碼一種絲/蘇氨酸激酶（serine/threoninekinase）:PIM1,它在人體的各種組織和細胞中廣泛表達,并在腫瘤發(fā)展中起重要作用。PIM是編碼絲狀/蘇氨酸激酶之一的原癌基因,由PIM1,PIM2和PIM3家族成員組成的PIM家族是鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶家族,其在不同組織中表達不同:PIM1在造血細胞中高度表達;PIM1激酶的潛在致腫瘤性在血液和實體腫瘤中高度表達。靶向抑制蛋白激酶可顯著提高膠質瘤患者的生存時間。研究表明,VEGF/AKT/eNOS信號通路參與神經膠質瘤細胞的生存、增殖、侵襲、凋亡及血管形成等進程中,迄今為止,PIM1激酶在神經膠質瘤及正常腦組織中的表達差異尚不清楚;PIM1激酶在神經膠質瘤細胞中的增殖、侵襲及血管形成過程中的作用及其分子機制尚不清楚;PIM1介導的膠質瘤細胞增殖、侵襲和血管形... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１正常腦組織及各級別膠質瘤組織中Ｐ１Ｍ１免疫組化染色（ｘ４０（））??

圖２－１?ｐＧＭＬＶ－ＳＣ５?ＲＮＡｉ慢病毒載體??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｐＧＭＬＶ－ＳＣ５?ＲＮＡｉ?Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｖｅｃｔｏｒ??Ｂ通過限制酶ＢａｍＨＩ?（ＧＧＡＴＣＣ）和ＥｃｏＲＩ?（ＧＡＡＴＴＣ）使載體線性化，并連??

Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ?ｒｅｓｕｌｔｓ??３）?ｓｈＲＮＡ與引物連接??連接體系如下：????回收載體?３＾１?（５０?ｎｇ）??Ｏｌｉｇｏ?引物?ｌ＾ｉｌ?（０．５｜ｉＭ）??Ｔ４?ＤＮＡ?ｌｉｇａｓｅ?ｂｕｆｆｅｒ?１?－５［ｉｌ????Ｔ４?ＤＮＡ?連接酶?Ｕｉｌ???ｄｄＨ：Ｑ?補足?１５ｐｌ??于２５?°Ｃ水浴中孵育３０?ｍｉｎ。??４）轉化??細胞置于冰上自然融化，連接產物全部加入細胞，冰上２８ｍｉｎ，４２°Ｃ水浴??９０ｓ熱休克。然后迅速放置在冰上３－６分鐘。在３７°Ｃ下以１９０ｒｐｍ振蕩添加ｌｍｌ??不含抗生素的ＬＢ培養(yǎng)基４７分鐘。以２９００ｒｐｍ離心３分鐘，棄去約７２０?ｕ?１上??皿，器，??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]熱休克蛋白70及pim-1基因在白血病骨髓單個核細胞的表達特點及臨床意義[J]. 李穎,曠文勇,李睿娟,張廣森,彭宏凌.  中國實驗血液學雜志. 2008(02)



本文編號：3519151