腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見(jiàn)的惡性原發(fā)性腫瘤和死亡率最高的十類(lèi)腫瘤之一。目前,針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的常規(guī)治療方式如手術(shù)、放療、化療等均難以達(dá)到良好的治療效果。大多數(shù)有極好治療前景的藥物由于受血腦屏障（blood-brain barrier, BBB）限制或缺乏靶向性等因素難以自主濃集于膠質(zhì)瘤部位,從而無(wú)法發(fā)揮療效。因此,腦膠質(zhì)瘤的治療仍然是一個(gè)全球性的難題。靶向納米載藥系統(tǒng)在腫瘤的治療中逐漸突顯出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和良好的臨床應(yīng)用前景。本文針對(duì)腦膠質(zhì)瘤早期及中晚期的不同生理特性,設(shè)計(jì)了以下兩種藥物靶向遞送及治療策略。1、腦膠質(zhì)瘤早期,BBB保持完整,藥物需通過(guò)跨BBB主動(dòng)靶向才能到達(dá)膠質(zhì)瘤部位。選用對(duì)BBB及膠質(zhì)瘤細(xì)胞的高親和性多肽作為靶向頭基,有望實(shí)現(xiàn)BBB-膠質(zhì)瘤雙重靶向效果。鑒于膠質(zhì)瘤呈蟹爪樣浸潤(rùn)生長(zhǎng),與正常的腦組織無(wú)明顯邊界的特點(diǎn),有必要選用能特異性識(shí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞的藥物,在不損傷正常腦細(xì)胞的基礎(chǔ)上有效殺傷膠質(zhì)瘤細(xì)胞。2、在腦膠質(zhì)瘤中晚期,BBB受到破壞；此時(shí)的腦膠質(zhì)瘤與一般腫瘤一樣,具有EPR效應(yīng)和腫瘤微環(huán)境。藥物可以通過(guò)EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向直接蓄積于膠質(zhì)瘤部位。在此基礎(chǔ)上,采用具有高效介導(dǎo)藥物跨膜入胞... 

【文章來(lái)源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 Angiopep修飾的載基因納米粒靶向治療腦膠質(zhì)瘤
    1 材料和儀器
        1.1 試劑和材料
        1.2 儀器
        1.3 細(xì)胞株
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 PAMAM-PEG-Angiopep的合成與表征
        2.3 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的制備與表征
            2.3.1 制備
            2.3.2 粒徑、Zeta電位
            2.3.3 透射電鏡
        2.4 PAMAM-PEG-Angiopep/DNA體外毒性考察
        2.5 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的入胞情況
        2.6 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL體外藥效學(xué)評(píng)價(jià)
        2.7 腦膠質(zhì)瘤模型鼠的構(gòu)建
        2.8 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)
            2.8.1 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方案
            2.8.2 原位TUNEL檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤凋亡
            2.8.3 腦膠質(zhì)瘤模型鼠存活時(shí)間考察
        2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 PAMAM-PEG-Angiopep的表征
        3.2 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的表征
        3.3 PAMAM-PEG-Angiopep/DNA體外毒性考察
        3.4 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的入胞情況
        3.5 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL體外藥效學(xué)評(píng)價(jià)
        3.6 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)
            3.6.1 原位TUNEL檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤凋亡
            3.6.2 腦膠質(zhì)瘤模型鼠存活時(shí)間考察
    4 討論
        4.1 載基因納米粒的系統(tǒng)安全性及粒徑分布情況
        4.2 載基因納米粒進(jìn)入腫瘤細(xì)胞及基因轉(zhuǎn)染能力
        4.3 載基因納米粒治療腦膠質(zhì)瘤的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
    5 小結(jié)
第二章 dtACPP修飾的腫瘤靶向智能納米粒的構(gòu)建及體內(nèi)外評(píng)價(jià)
    第一節(jié) dtACPP及相應(yīng)納米載體的設(shè)計(jì)、構(gòu)建及評(píng)價(jià)
        1 材料和儀器
            1.1 材料和試劑
            1.2 儀器
            1.3 細(xì)胞株
            1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 腫瘤靶向性納米載體dtACPPD的合成與表征
                2.2.1 dtACPPD的合成
                2.2.2 dtACPPD的表征
            2.3 MMP2酶切
            2.4 SDS-PAGE驗(yàn)證MMP2酶切效果
            2.5 dtACPPD在不同細(xì)胞系上的攝取
            2.6 荷瘤模型鼠的構(gòu)建
                2.6.1 腦膠質(zhì)瘤模型鼠
                2.6.2 皮下瘤模型鼠
            2.7 dtACPPD在荷瘤模型鼠中的體內(nèi)分布
                2.7.1 dtACPPD在腦膠質(zhì)瘤模型鼠中的體內(nèi)分布
                2.7.2 dtACPPD在皮下瘤模型鼠中的體內(nèi)分布
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 dtACPPD的表征
            3.2 SDS-PAGE驗(yàn)證MMP2酶切效果
            3.3 dtACPPD在不同細(xì)胞系上的攝取
            3.4 dtACPPD在荷瘤模型鼠中的體內(nèi)分布
                3.4.1 dtACPPD在腦膠質(zhì)瘤模型鼠中的體內(nèi)分布
                3.4.2 dtACPPD在皮下瘤模型鼠中的體內(nèi)分布
        4 討論
            4.1 去屏蔽化驗(yàn)證
            4.2 dtACPPD的細(xì)胞攝取效率
            4.3 dtACPPD的腫瘤靶向性
    第二節(jié) dtACPP修飾的腫瘤靶向智能納米粒的構(gòu)建及體內(nèi)外評(píng)價(jià)
        1 材料和儀器
            1.1 材料和試劑
            1.2 儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 腫瘤靶向智能納米粒dtACPPD/DNA的制備和包封情況
                2.1.1 制備
                2.1.2 凝膠電泳
            2.2 dtACPPD/DNA的表征
                2.2.1 粒徑、Zeta電位
                2.2.2 原子力顯微鏡
            2.3 dtACPPD/DNA在不同細(xì)胞系上的毒性考察
            2.4 dtACPPD/DNA在不同細(xì)胞系上的攝取情況
            2.5 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的體內(nèi)分布
                2.5.1 dtACPPD/DNA在腦膠質(zhì)瘤模型鼠上的體內(nèi)分布
                2.5.2 dtACPPD/DNA在皮下瘤模型鼠上的體內(nèi)分布
            2.6 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的瘤內(nèi)基因表達(dá)
                2.6.1 dtACPPD/DNA在腦膠質(zhì)瘤模型鼠上的瘤內(nèi)基因表達(dá)
                2.6.2 dtACPPD/DNA在皮下瘤模型鼠上的瘤內(nèi)基因表達(dá)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 dtACPPD/DNA凝膠電泳
            3.2 dtACPPD/DNA的表征
            3.3 dtACPPD/DNA在不同細(xì)胞系上的毒性考察
            3.4 dtACPPD/DNA在不同細(xì)胞系上的細(xì)胞攝取效率評(píng)價(jià)
                3.4.1 dtACPPD/DNA在U-87細(xì)胞系上的攝取
                3.4.2 dtACPPD/DNA在BEL-7402細(xì)胞系上的攝取
            3.5 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的體內(nèi)分布
                3.5.1 dtACPPD/DNA在腦膠質(zhì)瘤模型鼠上的體內(nèi)分布
                3.5.2 dtACPPD/DNA在皮下瘤模型鼠上的體內(nèi)分布
            3.6 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的瘤內(nèi)基因表達(dá)
                3.6.1 dtACPPD/DNA在腦膠質(zhì)瘤模型鼠上的瘤內(nèi)基因表達(dá)
                3.6.2 dtACPPD/DNA在荷皮下瘤模型鼠上的瘤內(nèi)基因表達(dá)
        4 討論
            4.1 腫瘤靶向納米載體dtACPPD包封質(zhì)粒DNA的能力
            4.2 dtACPP修飾的載基因納米粒的細(xì)胞攝取效率
            4.3 dtACPPD/DNA的腫瘤靶向性及瘤內(nèi)基因轉(zhuǎn)染能力
        5 小結(jié)
第三章 dtACPP修飾的腫瘤靶向智能納米粒聯(lián)合治療腦膠質(zhì)瘤
    1 材料和儀器
        1.1 材料和試劑
        1.2 儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 腫瘤靶向智能雙載藥納米粒dtACPPD/shVEGF-DOX的制備和表征
            2.1.1 shVEGF-DOX復(fù)合物的制備
            2.1.2 dtACPPD/shVEGF-DOX的制備
            2.1.3 dtACPPD/shVEGF-DOX凝膠電泳
            2.1.4 dtACPPD/shVEGF-DOX的表征
        2.2 膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)源性VEGF mRNA下調(diào)的體外評(píng)價(jià)
        2.3 shVEGF與DOX誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的體外評(píng)價(jià)
        2.4 體內(nèi)抗腦膠質(zhì)瘤藥效學(xué)綜合評(píng)價(jià)
            2.4.1 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方案
            2.4.2 腦膠質(zhì)瘤組織中內(nèi)源性VEGF的下調(diào)評(píng)價(jià)
            2.4.3 腦膠質(zhì)瘤組織中的血管生成抑制評(píng)價(jià)
            2.4.4 在體檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡
            2.4.5 原位TUNEL免疫熒光檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡
            2.4.6 腦膠質(zhì)瘤模型鼠存活時(shí)間及體重變化的考察
        2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 dtACPPD/shVEGF-DOX雙載藥納米粒的制備和表征
            3.1.1 shVEGF-DOX復(fù)合物的表征
            3.1.2 dtACPPD/shVEGF-DOX凝膠電泳
            3.1.3 dtACPPD/shVEGF-DOX的表征
        3.2 膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)源性VEGF mRNA下調(diào)的體外評(píng)價(jià)
        3.3 shVEGF與DOX誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的體外評(píng)價(jià)
        3.4 體內(nèi)抗腦膠質(zhì)瘤藥效學(xué)綜合評(píng)價(jià)
            3.4.1 腦膠質(zhì)瘤組織中內(nèi)源性VEGF的下調(diào)評(píng)價(jià)
            3.4.2 腦膠質(zhì)瘤組織中的血管生成抑制評(píng)價(jià)
            3.4.3 在體檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡
            3.4.4 原位TUNEL免疫熒光檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡
            3.4.5 腦膠質(zhì)瘤模型鼠的體重變化及存活時(shí)間
    4 討論
        4.1 dtACPPD/shVEGF下調(diào)VEGF
        4.2 聯(lián)合給藥的必要性
    5 小結(jié)
全文總結(jié)
創(chuàng)新性
中英文對(duì)照縮寫(xiě)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文
榮譽(yù)獎(jiǎng)項(xiàng)
致謝



本文編號(hào)：3504839