工作目的:血腦屏障是由內皮細胞、周細胞和星形膠質細胞等構成的復雜結構,位于腦實質和血管系統(tǒng)之間。血腦屏障的存在主要是將中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周組織分開。為了維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內的穩(wěn)態(tài)平衡。血腦屏障控制著從血液到大腦以及從大腦到血液的物質、營養(yǎng)和細胞轉移。包括腦損傷、缺血性中風、多發(fā)性硬化癥、癲癇、帕金森病、阿爾茨海默病和重度抑郁癥在內的多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病均發(fā)現(xiàn)了血腦屏障破壞的病理學基礎。血腦屏障完整性的喪失將導致循環(huán)內的細胞因子和免疫細胞進入中樞神經(jīng)系統(tǒng),進一步激活神經(jīng)膠質細胞并引起細胞外環(huán)境的改變,對神經(jīng)系統(tǒng)的功能造成十分嚴重的破壞。因此,在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中探索一種有效的保護血腦屏障的方法十分必要,將會為臨床上的治療提供新的思路進而改善患者預后并減輕其造成的巨大社會負擔。在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中,組蛋白去乙�；福℉istone deacetylase,HDAC）及組蛋白去乙酸化酶3（Histone deacetylase3,HDAC3）的作用已被發(fā)掘并應用。然而不同HDAC亞型,尤其是HDAC3在神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障方面的調控作用還知之甚少。已知HDAC3在調控神經(jīng)炎癥和神經(jīng)保護方面的作用,在多種神經(jīng)... 

【文章來源】：南京大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?ＨＢＭＥＣ中ＯＧＤ／Ｒ后促進核內ＨＤＡＣ３表達增高并增強核內ＨＤＡＣ３的活性

ｃａｄｈｅｒｉｎ的表達和分布情況。使用免疫熒光我們發(fā)現(xiàn)，相較于正常狀態(tài)，ＯＧＤ／Ｒ損??傷顯著降低了這些蛋白在膜上的表達水平，而使用５ｕＭ的ＲＧＦＰ９６６處理可以顯著改??善Ｃｌａｕｄｉｎ－５在細胞膜的表達（圖２－３?ａ）。進一步，我們使用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ檢測蛋白??４２??

丨！?１１１??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＯＧＤ／Ｒ?ＯＧＤ／Ｒ??＋ＲＧＦＰ９６６??圖２－２特異性抑制ＨＤＡＣ３保護ＨＢＭＥＣ在ＯＧＤ／Ｒ后發(fā)生的通透性完整性損傷。??（ａ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ檢測結果顯示，使用ＲＧＦＰ９６６特異性抑制ＨＤＡＣ３后，組蛋白??Ｈ３Ｋ９的乙酰化水平增高。（ｂ）利用ＩｍａｇｅＪ軟件對Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ條帶進行的灰度測??定統(tǒng)計結果。（ｃ）使用ＲＧＦＰ９６６對ＨＤＡＣ１－３干預特異性情況的活性檢測。（ｄ）??在ＨＢＭＥＣ接受ＯＧＤ／Ｒ模型中，給予ＲＧＦＰ９６６處理并使用ＨＴＣ－ｄｅｘｔｒａｎ對內皮細胞??通透性進行滲透實驗（ｅ）在ＨＢＭＥＣ接受ＯＧＤ／Ｒ模型中，給予ＲＧＦＰ９６６處理并使??用ＴＥＥＲ實驗對內皮細胞的完整性進行檢測。（ｆ）使用ＷＳＴ－１對細胞活性進行檢測??（ｇ）使用ＴＵＮＥＬ實驗對細胞凋亡進行檢測。（ｈ）?ＴＵＮＥＬ陽性細胞定量統(tǒng)計圖。??ｎ＝４，＊ｐ＜０．０５ｖｓ?ｎｏｒｍａｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ，＃ｐ＜０．０５?ｖｓＯＧＤ／Ｒ。??３．３特異性抑制ＨＤＡＣ３可以恢復ＯＧＤ／Ｒ后緊密連接蛋白Ｃｌａｕｄｉｎ－５的表達??鑒于緊密連接蛋白對內皮細胞通透性的影響，在一共２４小時的ＯＧＤ／Ｒ損傷后，??我們進一步檢測了緊密連接蛋白ＺＯ－１、Ｃｌａｕｄｉｎ－５和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ以及黏著連接蛋白ＶＥ－??ｃａｄｈｅｒｉｎ的表達和分布情況。使用免疫熒光我們發(fā)現(xiàn)，相較于正常狀態(tài)，ＯＧＤ／Ｒ損??傷顯著降低了這些蛋白在膜上的表達水平，而使用５ｕＭ的ＲＧＦＰ９６６處理可以顯著改??善Ｃｌａｕｄｉｎ－５在細胞膜的表達（圖２－３?ａ）。進一步


本文編號：3499060