[研究目的]通過甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MSP）檢測法對腦膠質(zhì)瘤患者腦脊液中6-O-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）基因甲基化進行檢測,同時利用免疫組化技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中的MGMT蛋白,探討膠質(zhì)瘤患者腦脊液中MGMT基因的甲基化狀態(tài)和MGMT蛋白表達在膠質(zhì)瘤組織中的關(guān)系,從而尋求一種間接反映膠質(zhì)瘤組織中表達MGMT蛋白的指標,為制定膠質(zhì)瘤患者個體化的化療方案提供理論依據(jù)。[研究方法]收集云南省腫瘤醫(yī)院2011年3月-2012年7月術(shù)前診斷疑似惡性膠質(zhì)瘤患者的腦脊液,整理記錄患者的臨床病理資料,篩選出術(shù)后病理確診為惡性膠質(zhì)瘤患者的腦脊液,采用DNA提取試劑盒（DNeasy（?） Blood&Tissue69504）提取腦脊液DNA在驗證人基因組DNA存在后,運用MSP技術(shù)檢測腦脊液DNA中MGMT基因啟動子甲基化的情況。同時選用10例腦�；颊叩哪X脊液標本做為惡性膠質(zhì)瘤患者腦脊液標本的對照組,對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學相關(guān)性分析。[研究結(jié)果]1.共提取腦脊液DNA55例,其中腦膠質(zhì)瘤患者組、腦梗患者組各為45例和10例。2.腦膠質(zhì)瘤患者組的腫瘤組織中的MGMT蛋白甲基... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
中英文對照表
中文摘要
Abstract
前言
一、腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表的的檢測
    1. 材料
        1.1 研究對象
            1.1.1 入選標準
            1.1.2 剔除標準
        1.2 主要實驗試劑及試劑盒
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 實驗技術(shù)路線圖
        1.5 HE染色
        1.6 免疫組化
        1.7 免疫組化陽性結(jié)果判斷
二、腦脊液DNA提取和亞硫酸氫鹽修飾
    2. 材料
        2.1 研究對象
        2.2 主要實驗試劑及試劑盒
        2.3 主要實驗儀器
        2.4 提取腦脊液DNA主要實驗步驟
        2.5 利用微量紫外分光光度計測量DNA的濃度和純度
        2.6 運用0.7%瓊脂糖凝膠電泳所提取的DNA判斷其濃度及完整性
        2.7 DNA的重亞硫酸氫鹽修飾
        2.8 結(jié)果
            2.8.1 人類基因組DNA的確認
三、檢測腦脊液MGMT基因甲基化
    3. 材料
        3.1 研究對象
        3.2 主要實驗試劑及試劑盒
        3.3 主要實驗儀器
    4. 實驗技術(shù)及方法
        4.1 MSP-PCR反應(yīng)
        4.2 運用瓊脂糖凝膠電泳后成像及結(jié)果判定
        4.3 臨床資料采集及統(tǒng)計學分析
    5 結(jié)果
        5.1 惡性腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表達與腦脊液中MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)的相關(guān)性分析
        5.2 惡性腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表達與性別的關(guān)系
        5.3 惡性腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表達與年齡的關(guān)系
        5.4 腦膠質(zhì)瘤患者組的腦脊液MGMT基因啟動子甲基化率與性別的關(guān)系
        5.5 腦膠質(zhì)瘤患者組的腦脊液MGMT基因啟動子甲基化率與年齡的關(guān)系
        5.6 腦梗患者組與腦膠質(zhì)瘤患者組的腦脊液MGMT基因啟動子甲基化率的關(guān)系
四、討論
    1 膠質(zhì)瘤的診斷
    2 膠質(zhì)瘤的耐藥機制及其調(diào)節(jié)
    3 膠質(zhì)瘤腫瘤組織中MGMT蛋白的意義
    4 腦脊液中MGMT基因啟動子甲基化的臨床意義
    5 DNA甲基化的檢測及方法的選擇
    6 試驗中遇到的問題及處理方式
五、結(jié)論
六、參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]神經(jīng)膠質(zhì)瘤的表觀遺傳學機制[J]. 王啟瓊,李銀,楊學習.  分子診斷與治療雜志. 2011(05)
[2]DNA修復(fù)相關(guān)基因啟動子甲基化和腫瘤化療耐藥的進展[J]. 韓婧,李江.  上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2011(01)
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[9]我國膠質(zhì)瘤診斷治療現(xiàn)狀和努力方向[J]. 陳忠平,周旺寧.  中國腫瘤. 2005(02)
[10]人腦膠質(zhì)瘤腫瘤標志物研究現(xiàn)狀[J]. 王先祥,馮春國,李長元.  安徽醫(yī)學. 2004(06)

碩士論文
[1]惡性膠質(zhì)瘤組織MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)及蛋白表達與患者臨床預(yù)后的相關(guān)性研究[D]. 羅敏捷.南方醫(yī)科大學 2012



本文編號：3482509