癲癇是最常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,至今尚未研究透徹。為了研究癲癇的發(fā)病機(jī)制,動(dòng)物模型被廣泛應(yīng)用,但是動(dòng)物模型的癲癇生理和人類(lèi)不同,給應(yīng)用帶來(lái)了一定的限制。多能誘導(dǎo)干細(xì)胞（iPSCs）具備胚胎干細(xì)胞（ESCs）體外高度增殖和多向分化的能力,并且由患者成體細(xì)胞重編程獲得的iPSC與供體保留著相同的遺傳背景,同時(shí)解決了ESCs的來(lái)源問(wèn)題,因此在再生醫(yī)學(xué)和細(xì)胞替代治療領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。目前,已經(jīng)有將iPSCs技術(shù)應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的報(bào)道,特別是一些神經(jīng)退行性疾病和神經(jīng)發(fā)育異常性疾病,例如帕金森病、阿爾茨海默病和進(jìn)行性脊髓性肌萎縮癥等,但是將iPSCs技術(shù)應(yīng)用于癲癇尚未見(jiàn)報(bào)道。不同類(lèi)型的體細(xì)胞誘導(dǎo)分化為iPS細(xì)胞的效率有所不同,iPSCs也存在錯(cuò)誤表達(dá)來(lái)源體細(xì)胞胚層的信息的風(fēng)險(xiǎn),因此利用神經(jīng)祖細(xì)胞獲得iPSCs較為理想,但是利用神經(jīng)外胚層細(xì)胞獲得iPSCs的研究尚缺乏。本課題將分為三部分研究通過(guò)將癲癇患者來(lái)源的神經(jīng)祖細(xì)胞重編程為特異性的iPSCs,這些細(xì)胞可以大量擴(kuò)增,將其分化神經(jīng)細(xì)胞后,我們通過(guò)分析其電生理特征,對(duì)候選的GABRG2基因進(jìn)行分析,將這些具有特異性的iPS... 

【文章來(lái)源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

原代神經(jīng)祖:.ffl胞A、培養(yǎng)15天形成的原代神經(jīng)球50x;B、培養(yǎng)15天形成的原代神經(jīng)球200>.

■Mm圖2: iPS細(xì)胞的鏡下觀(guān)察A、原代iPS集落50X，轉(zhuǎn)染第18天左右，原代iPS克隆幵始形成，鏡下可見(jiàn)直徑約為15um的有核細(xì)胞，細(xì)胞核較大，細(xì)胞與周?chē)M織邊界清晰，細(xì)胞周邊有折光性較強(qiáng)的脂質(zhì)小滴；B、第五代集落50X，培養(yǎng)至第五代iPS克隆時(shí)，可見(jiàn)形成的iPS細(xì)胞克隆邊界更加清晰

我們?nèi)〔糠謎PS細(xì)胞克隆進(jìn)行堿性憐酸酶染色，由神經(jīng)祖細(xì)胞和成纖維細(xì)胞來(lái)源的iPS細(xì)胞克隆均呈棕紅色（圖3)，說(shuō)明獲得的iPS細(xì)胞克隆處于未分化狀態(tài)。而運(yùn)用免疫勞光技術(shù)檢測(cè)iPS細(xì)胞克隆，人未分化ES細(xì)胞特異性標(biāo)志0CT4、S0X2、SSEA-4和TRA-1 -81等免疫勞光染色均呈高表達(dá)狀態(tài)。；鐘：圖3: iPS細(xì)胞第五代集落以及AP染色A、第五代集落200X (接種第一天)；B、第五代集落AKP染色50X ,兩種組織來(lái)源的iPS細(xì)胞AP染色均呈現(xiàn)特征性的紅色。Figure 3: iPS cells fifth-generation clones and AP staining. A，The fifth-generationclones 200x (The first day of inoculation) ； B, The AKP staining to the fifthgeneration clones 50x，two kinds of organizations source of iPS cells AP stainingshowed a characteristic red .4、畸胎瘤生成實(shí)驗(yàn)iPS注入小鼠肌肉中9周后，注射部位可見(jiàn)直徑約2?4cin大小的腫塊形成，成纖維細(xì)胞和祌經(jīng)祖細(xì)胞來(lái)源的iPS細(xì)胞形成畸胎瘤的能力相仿。將其分離后，利用4%的多聚甲酵固定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]GABRG2基因多態(tài)性在GEFS+中分布的研究[J]. 孟海嬌,洪震,朱國(guó)行,羅玉敏,任惠民.  神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生. 2003(06)



本文編號(hào)：3474284