缺血性腦血管病是一種常見的腦血管病,致殘和致死率高,且在治療過程中容易造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺氧/再灌注損傷。研究發(fā)現(xiàn),血管緊張素Ⅱ2型受體（AngiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R）能影響正常的神經(jīng)可塑性和學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能;可舒張血管,調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育,促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化,參與組織結(jié)構(gòu)的修復(fù)和重塑;可通過促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)開放,改善腦血液循環(huán),對(duì)缺血性腦損傷起保護(hù)作用。目前,AT2R活化在神經(jīng)細(xì)胞缺血/再灌注損傷中的具體作用及機(jī)制尚不清楚。本研究旨在探討AT2R活化對(duì)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及初步機(jī)制。PC12細(xì)胞是大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞株,具有神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的一般特征,被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)生理學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的研究。本研究采用含10%胎牛血清的高糖DMEM完全培養(yǎng)基,于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)PC12細(xì)胞16²4h,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80-90%時(shí),棄去培養(yǎng)液,無菌PBS洗三次,用含化學(xué)性缺氧劑連二亞硫酸鈉（Na2S2O4）的無糖無血清培養(yǎng)基孵育1小時(shí),再更換新鮮10%胎牛血清高糖DMEM培養(yǎng)基,復(fù)制缺血/再灌注損傷的神經(jīng)細(xì)胞模型。缺... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
第二章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 細(xì)胞株
        2.2.1 主要試劑盒
        2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 其他
第三章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 藥品及試劑配制方法
        3.1.1 磷酸緩沖鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）的配制
        3.1.2 100nmol/L PD123319的配制
        3.1.3 100nmol/L CGP42112的配制
        3.1.4 5mg/ml噻唑藍(lán)（MTT）的配制
        3.1.5 30%凝膠儲(chǔ)備液的配制
        3.1.6 1mol/L三羥甲基氨基甲烷[Tris（hydroxymethyl）aminomethane，Tris]（PH 6.8）的配制
        3.1.7 1.5mol/L Tris-HCl（p H 8.8）的配制
        3.1.8 10%十二烷基硫酸鈉（Sodium dodecyl sulfate，SDS）的配制
        3.1.9 10%過硫酸銨的配制
        3.1.10 膜轉(zhuǎn)移緩沖液的配制
        3.1.11 5 × 聚丙烯酰胺凝膠 （ sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）電泳緩沖液的配制
        3.1.12 三羥甲基氨基甲烷緩沖液（Tris Buffered Salinewith Tween-20，TBST）的配制
        3.1.13 封閉緩沖液的配制
        3.1.14 考馬斯亮藍(lán)染色液的配制
        3.1.15 蛋白裂解液的配制
        3.1.16 4%臺(tái)盼藍(lán)母液的配制
    3.2 PC12細(xì)胞的體外培養(yǎng)與傳代
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 細(xì)胞傳代
        3.2.3 細(xì)胞凍存
        3.2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
    3.3 缺氧/再供氧損傷細(xì)胞模型的建立
    3.4 臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察細(xì)胞活力變化
    3.5 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率
    3.6 Western blot免疫印跡
        3.6.1 總蛋白提取
        3.6.2 BCA檢測(cè)蛋白濃度
        3.6.3 SDS-PAGE電泳
    3.7 反轉(zhuǎn)錄PCR
        3.7.1 目的基因引物的合成
        3.7.2 RNA提取
        3.7.3 RNA質(zhì)量檢測(cè)及濃度測(cè)定
        3.7.4 第一鏈c DNA合成
        3.7.5 PCR
        3.7.6 RNA瓊脂糖電泳
    3.8 圖像分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 建立缺氧/再供氧損傷細(xì)胞模型
        4.1.1 Na2S2O4對(duì)PC12細(xì)胞存活率的影響
        4.1.2 臺(tái)盼藍(lán)染色觀察細(xì)胞活力變化
    4.2 AT2R對(duì)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        4.2.1 AT2R激動(dòng)劑對(duì)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        4.2.2 AT2R抑制劑對(duì)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
    4.3 P38MAPK抑制劑對(duì)AT2R誘導(dǎo)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        4.3.1 P38MAPK抑制劑對(duì)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞中P38MAPK磷酸化的影響
        4.3.2 P38MAPK抑制劑對(duì)AT2R誘導(dǎo)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        4.3.3 P38MAPK抑制劑對(duì)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)中Bcl-2、Bax表達(dá)的影響
    4.4 臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察P38MAPK抑制劑對(duì)AT2R誘導(dǎo)缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
第五章 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 血管緊張素 2 型受體與缺血性腦卒中
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝
課題資助


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3474079