目的制備魚藤酮（Rotenone,Rot）刺激人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y）的帕金森病（Parkinson’s Disease,PD）體外模型,探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）上清液對PD細(xì)胞模型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum,ER）應(yīng)激的影響。方法PD細(xì)胞模型制備:SH-SY5Y細(xì)胞置于內(nèi)含10%（體積分?jǐn)?shù)）滅活胎牛血清、1%雙抗的DMEM/F12培養(yǎng)基中,在37℃、5%（體積分?jǐn)?shù)）CO₂恒溫箱中培養(yǎng),每2天換液1次,待細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶底的80%-90%時,按1:3進(jìn)行傳代培養(yǎng)。設(shè)0μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L濃度的魚藤酮處理SH-SY5Y細(xì)胞24h,采用CCK-8法檢測不同濃度Rot下的細(xì)胞活力,Annexin-V/PI染色、流式細(xì)胞儀檢測不同濃度Rot的細(xì)胞凋亡及蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測不同濃度Rot刺激SH-SY5Y細(xì)胞的αSyn表達(dá)水平,結(jié)果用Image J進(jìn)行條帶灰... 

【文章來源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度魚藤酮刺激SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)（倒置顯微鏡×100）

且呈濃度依賴性升高（圖3、表 2），且魚藤酮濃度為 1.0μmol/L 和 5.0μmol/L 時，與空白對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果表明：在相同時間內(nèi)，SH-SY5Y 細(xì)胞的凋亡率隨魚藤酮濃度的增大而增加。圖 3 不同濃度魚藤酮培養(yǎng) SH-SY5Y 細(xì)胞 24h 后細(xì)胞凋亡率Fig.3 Apoptosis rate of SH-SY5Y cells cultured with different concentrations of rotenone for 24h表 2 不同濃度魚藤酮刺激 SH-SY5Y 細(xì)胞 24h 后，細(xì)胞早期凋亡率（ x s）Table 2 Early apoptosis rate of SH-SY5Y cells stimulated by different concentrations of rotenone for24 hours ( )組別（μmol/L） N 細(xì)胞凋亡（ ）F P0 3 3.56±0.54 91.495 0.0000.1 3 5.60±0.541.0 3 16.39±1.65*5.0 3 29.541±3.91*注： 1.0μmol/L Rot 組和 5.0μmol/L Rot 組與 0 組相比*P＜0.05。1.2.4 不同濃度魚藤酮刺激 SH-SY5Y 細(xì)胞內(nèi) α-synuclein 的表達(dá)水平

第 1 章 實(shí)驗(yàn)研究蛋白分子量為 17kDa，是 PD 發(fā)病過程中標(biāo)志性錯誤折t 檢測各實(shí)驗(yàn)組 αSyn 的表達(dá)。結(jié)果顯示：24h 后，S酮濃度的增大而增多。0.1μmol/L 魚藤酮組較空白對無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；1.0μmol/L 和 5.0μmol/L4h 后 αSyn 表達(dá)較空白對照組相比明顯增多，且差異具圖 4、表 3）。酮誘導(dǎo) SH-SY5Y 細(xì)胞的帕金森病體外模型，可以得到明顯的表達(dá)，且在相同時間內(nèi)，其表達(dá)量在一定范圍內(nèi)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Human umbilical cord blood-derived stem cells and brain-derived neurotrophic factor protect injured optic nerve:viscoelasticity characterization[J]. Xue-man Lv,Yan Liu,Fei Wu,Yi Yuan,Min Luo.  Neural Regeneration Research. 2016(04)
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[3]維甲酸聯(lián)合神經(jīng)生長因子體外誘導(dǎo)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞定向分化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 陳乃耀,王大力,張江,李瑩.  陜西醫(yī)學(xué)雜志. 2010(04)



本文編號：3472639