蛋白聚集體的積累是許多神經(jīng)退行性疾病的典型特征。C9ORF72基因第一個內(nèi)含子中六個核苷酸重復(fù)序列GGGGCC（G4C2）的擴增是肌萎縮側(cè)索硬化癥（Amyotrophiclateralsclerosis,ALS）和額顳葉癡呆（Frontotemporal dementia,FTD）的最常見原因。攜帶（G4C2）重復(fù)擴增的轉(zhuǎn)錄物經(jīng)非ATG依賴性翻譯,產(chǎn)生神經(jīng)毒性二肽重復(fù)蛋白（Dipeptide repeat（DPR）:GR,GA,GP,PR,PA）并促成 ALS/FTD的發(fā)生。但是目前C9orf72-ALS/FTD的疾病外顯率并非100%,提示還有其他機制共同調(diào)節(jié)其發(fā)病。Ubiquilin2（UBQLN2）是另一種ALS致病基因,我們發(fā)現(xiàn)UBQLN2與GA蛋白聚集體共定位并相互作用,并且UBQLN2對于GA蛋白聚集體的清除是充分必要的。UBQLN2識別UBR5介導(dǎo)的GA蛋白聚集體泛素化并通過蛋白酶體和自噬系統(tǒng)清除它。UBQLN2的ALS/FTD病理突變部分喪失了對GA蛋白聚集體清除的能力。重要的是,外源表達UBQLN2促進了 GA蛋白聚集體的降解,并部分拯救了 GA誘導(dǎo)的神經(jīng)元變性和AL... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１?ＵＢＱＬＮ２蛋白對ＧＡ聚集體的清除是必須的??２９??

３．３?ＵＢＱＬＮ２病理性突變影響ＧＡ蛋白的清理??突變能導(dǎo)致ＡＬＳ／ＦＴＤ神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生，并且這段序列在不同物??種中保持著高度保守的同源性（圖３Ａ）。為了更好地了解突變是否會影響??其促進ＧＡ蛋白聚集體清理的功能，我們對？７ＳｇＺ＾２的ＰＸＸ區(qū)的５個病理性突變位??點進一步分析。首先，我們構(gòu)建了不同突變位點的ＵＢＱＬＮ２－Ｆｌａｇ質(zhì)粒，然后將其與??３２??

ＧＦＰ－ＧＡ蛋白聚集體的清理功能，而Ｐ４９７Ｓ，Ｐ５０９Ｓ這兩個位點突變幾乎不受影響。??有文獻報道ＵＢＱＬＮ２Ｐ５０６Ｔ突變影響了其與ＨＳＰ７０結(jié)合，導(dǎo)致功能喪失［２８］。我們??通過免疫共沉淀（Ｃｏ－ＩＰ）的方法對著幾個位點也進行了驗證（圖３Ｄ）。從圖中我們??可以看到Ｐ４８７丨，Ｐ５０６Ｔ，?Ｐ５２５Ｓ位點突變的ＵＢＱＬＮ２蛋白與ＨＳＰ７０結(jié)合能力顯著減??弱，而Ｐ４９７Ｓ，Ｐ５０９Ｓ這兩個位點突變的ＵＢＱＬＮ２蛋白與ＨＳＰ７０的結(jié)合能力沒有明??顯變化。我們可以得出結(jié)論：ＵＢＱＬＮ２需要在ＨＳＰ７０的協(xié)同作用下，才能將泛素化??的ＧＦＰ－ＧＡ蛋白聚集體運輸?shù)降鞍酌阁w或自噬系統(tǒng)進行降解，Ｐ４８７丨，Ｐ５０６Ｔ，?Ｐ５２５Ｓ??位點突變減弱了?ＵＢＱＬＮ２蛋白與ＨＳＰ７０的結(jié)合能力，導(dǎo)致ＵＢＱＬＮ２蛋白的功能缺失。??Ａ?Ｂ。必＃?分步??Ｐｒｏｔｅａｓｏｍ＾?ＨＳＦ７０?ＵｂｌｑｕＩＵｎ??ｔ＞｜ｎｄｌｎ＜ａ＿??血ｄｊｎＳＬ??ｂｌｎｊ！ｎｇ＿?？?？?ｉｎｓＧＡ??ｙ－?ｐｓｏｃｓｎ－??＼??Ｔ４？７Ｉ?Ｐ？７ＵＨ？?ＰＭ８８?ｐｓｚｓＢ?、、?ＵＢＱ２－Ｆｌａｇ??■ｏｕｓｅ?ＡＰＣＷＫＶＬ?Ｔ?ｌＩＴＰＶＣＰＶ?Ｉ?［ＣＰＩＣＰＩ?ｆ?－?ｆ?ＣＰＩＣＰＩＣＰＴＧＰＡ?Ｓ?ＣＳＴＣＴＣＩＰＰ?＾??ｒｅｉ?ＴＰＣＷＶＧＶＬ?Ｔ?ｉｉｒＦＡＪＰＶ?Ｉ?１ＧＰ


本文編號：3449849