目的:腦膠質(zhì)瘤是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤,預(yù)后較差,目前的治療選擇有限。因此,深入研究膠質(zhì)瘤細胞的生物學(xué)行為及其相關(guān)機制,對于尋找更有效治的療惡性腦膠質(zhì)瘤的新“靶標”具有重要意義。本文旨在研究轉(zhuǎn)錄因子BACH2與RNA結(jié)合蛋白FUS之間的相互作用對于調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞的惡性生物學(xué)行為的影響,并進一步深入研究其潛在的分子機制,即BACH2與FUS互作是否通過增強其對Linc00589的轉(zhuǎn)錄抑制作用下調(diào)Linc00589的表達,從而減弱Linc00589對microRNA（miR）-10b-5p RISC依賴的負性調(diào)控作用,進而增強miR-10b-5p與WWC3的3’UTR結(jié)合降低WWC3的表達,阻斷Hippo信號通路,促進膠質(zhì)瘤細胞惡性生物學(xué)行為。研究方法:實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織和細胞中BACH2,FUS,Linc00589,miR-10b-5p,WWC3的內(nèi)源性表達水平。為了研究BACH2和FUS相互作用的分子機制及其對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞惡性行為的影響,建立了穩(wěn)定表達沉默BACH2,FUS,過表達Linc00589,過表達及沉默miR-10b-5p和過表達及... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

BACH2、FUS內(nèi)源性表達及對膠質(zhì)瘤細胞生物學(xué)行為的影響。

本研究進一步采用免疫熒光實驗觀察BACH2與FUS在膠質(zhì)瘤細胞中的定位,結(jié)果如圖2A所示:代表BACH2的綠色熒光和代表FUS的紅色熒光富集于細胞質(zhì)及細胞核,融合圖像的細胞核中可見BACH2與FUS的共同定位。為明確二者是否存在相互作用,采用GST-Pulldown實驗結(jié)果如圖2B所示:與陰性對照GST+His-FUS組相比,GST-BACH2+His-FUS組可檢測出二者的結(jié)合,進而應(yīng)用CO-IP實驗進一步驗證了二者在體內(nèi)的結(jié)合作用(圖2C)。3.3 Linc00589 在膠質(zhì)瘤組織和細胞中低表達,過表達Linc00589 抑制膠質(zhì)瘤細胞惡性生物學(xué)行為

應(yīng)qRT-PCR方法檢測Linc00589在正常腦組織與不同級別膠質(zhì)瘤組織,以及HA細胞與U87、U251細胞中表達。結(jié)果顯示與正常腦組織相比,Linc00589在膠質(zhì)瘤組織中表達顯著降低,且表達水平隨膠質(zhì)瘤組織病理級別增加而降低(圖3A),在U87與U251細胞中Linc00589表達顯著低于HA細胞(圖3B)。在U87、U251細胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染過表達Linc00589,檢測細胞生物學(xué)行為的變化。結(jié)果顯示:與Linc00589(+)-NC組相比,Linc00589(+)組膠質(zhì)瘤細胞增殖、遷移侵襲能力均顯著減弱(圖3C,D),凋亡率顯著升高(圖3E)。3.4 沉默BACH2 抑制Linc00589 的轉(zhuǎn)錄,進而抑制膠質(zhì)瘤細胞惡性生物學(xué)行為


本文編號：3446507