目的：本課題主要通過構(gòu)建雙啟動(dòng)子介導(dǎo)的DCX和SPARC雙基因共表達(dá)重組腺病毒載體（Ad-DCX-SPARC）并轉(zhuǎn)染腦膠質(zhì)瘤U-87MG細(xì)胞，探討DCX和SPARC雙基因?qū)τ赨-87MG細(xì)胞生長、侵襲及放射敏感性的影響及其可能的作用機(jī)制，為膠質(zhì)瘤基因治療及其聯(lián)合放療提供理論依據(jù)。方法：構(gòu)建Ad-DCX-SPARC重組腺病毒載體；用激光共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)、流式細(xì)胞儀檢測表達(dá)GFP的細(xì)胞比例確定重組腺病毒對(duì)U-87MG細(xì)胞的最佳感染劑量；RT-PCR和Western blot法檢測DCX和SPARC在U-87MG細(xì)胞mRNA和蛋白水平的表達(dá)；采用MTT法檢測DCX和SPARC共表達(dá)（DCX-SPARC）及聯(lián)合X線對(duì)膠質(zhì)瘤U-87MG細(xì)胞生長的影響；Transwell實(shí)驗(yàn)觀察DCX-SPARC對(duì)U-87MG細(xì)胞侵襲能力的影響；采用克隆形成法計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)染Ad-DCX-SPARC及聯(lián)合X線照射的U-87MG細(xì)胞克隆形成率；流式細(xì)胞儀檢測DCX-SPARC對(duì)X線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布的影響；Western blot法分析凋亡相關(guān)蛋白Bad、Bax、Bcl-2和侵襲相關(guān)蛋... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pAdTrack-CMV轉(zhuǎn)移載體示意圖

DCX和SPARC雙基因的連接方式示意圖

PCRDCX和SPARC基因的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果


本文編號(hào)：3437569