本文關鍵詞：p-p38MAPK在實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠發(fā)病不同時期脊髓組織的表達及SB203580保護機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)脫髓鞘為主要病理特點的自身免疫性疾病。具有反復發(fā)作與緩解、每況愈下的臨床特點,為青年人中最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一。目前,同其他大多數(shù)自身免疫性疾病類似,MS的病因及發(fā)病機制尚無定論,通常認為MS發(fā)病是個體遺傳易感傾向與環(huán)境因素共同作用的結果。其發(fā)病具體涉及免疫炎癥、氧化應激等多種機制。其中CD4+T細胞介導的免疫炎癥在致病過程中起到重要作用。CD4+T細胞具有多種亞型,包括Th1細胞,Th2細胞,Th17細胞。其中以分泌IL-17為特征性細胞因子的Th17細胞在其發(fā)病及病程進展中起到至關重要的作用。近年來研究發(fā)現(xiàn),一個新的信號通路p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路可以作用于Th17細胞分化的調(diào)控而受到極大的關注。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)為細胞內(nèi)的重要信號傳遞者。p38 MAPK是MAPK家族中的重要組成部分,其主要在細胞應激和炎癥刺激時被磷酸化激活,激活后的形式為p-p38MAPK。本實驗通過對p38MAPK、p-p38MAPK(p38MAPK激活形式)及IL-17在實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠發(fā)病初期、高峰期、緩解期,于腰膨大處脊髓組織中動態(tài)表達的研究,探討p38MAPK在EAE中可能的致病機制。并且,本實驗進一步應用SB203580藥物對EAE小鼠進行干預,SB203580是一種常用的p38MAPK抑制劑,其可以選擇性抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)CD4+T細胞中表達的主要p38MAPK亞型(p38α和p38βMAPK亞型)的磷酸化激活過程。應用SB203580后,對小鼠EAE發(fā)病高峰期時的發(fā)病率、EAE嚴重程度、體重變化情況以及上述指標表達水平的變化的研究,初步探索SB203580對MS動物模型EAE小鼠的保護作用及其可能機制,為進一步探討多發(fā)性硬化的致病機制及治療靶點提供有具有實際意義的實驗基礎。方法:將80只C57BL/6小鼠隨機分為正常對照組、EAE初期組、EAE高峰期組、EAE緩解期組和SB203580組,每組16只。將EAE初期組、EAE高峰期組、EAE緩解期組和SB203580組以MOG35-55為抗原免疫C57BL/6小鼠建立EAE致病模型。自免疫當天,SB203580組小鼠給予干預藥物SB203580以0.2mg/kg的計量每日腹腔注射,其余組小鼠均只給予等劑量的藥物溶劑二甲基亞砜(DMSO)每日腹腔注射,觀察小鼠的體重變化、發(fā)病情況及神經(jīng)功能缺損評分。EAE初期組在EAE發(fā)病初期,即免疫后第13天留取標本;EAE高峰期組和SB203580組小鼠在EAE高峰期,即免疫后第20天留取標本;EAE緩解期組在EAE的緩解期,即免疫后第30天留取標本。于上述相應時期,留取各組小鼠腰膨大處組織進行灌注取材,以HE染色觀察其炎癥細胞浸潤程度,以沙爾堅牢藍染色觀察其脫髓鞘情況;于上述相應時期留取各組小鼠腰膨大處組織進行新鮮取材用于western blot技術檢測p38MAPK、p-p38MAPK及IL-17蛋白表達情況。結果:1空白對照組、EAE高峰期組、SB203580組小鼠高峰期發(fā)病率相比:空白對照組小鼠始終未發(fā)病。SB203580組小鼠EAE的發(fā)病率較EAE高峰期組小鼠顯著降低(P0.05)。2空白對照組、EAE高峰期組、SB203580組小鼠高峰期神經(jīng)功能缺損評分相比:空白對照組小鼠神經(jīng)功能缺損評分為0。SB203580組小鼠神經(jīng)功能缺損評分同EAE高峰期組小鼠相比明顯下降(P0.05)。3空白對照組、EAE高峰期組、SB203580組小鼠高峰期體重均數(shù)相比:EAE高峰期組及SB203580組小鼠體重出現(xiàn)不同程度減輕(P0.05)。其中EAE高峰期組較SB203580組小鼠體重減輕程度更加明顯(P0.05)。4 EAE初期組、EAE高峰期組、EAE緩解期組與空白對照組相比,腰膨大處脊髓組織白質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)不同程度炎性細胞浸潤及脫髓鞘;EAE高峰期組同EAE初期組及緩解期組相比,其炎性病灶數(shù)目及脫髓鞘嚴重程度和區(qū)域增多更為明顯;SB203580組同EAE高峰期組相比,其炎性病灶及脫髓鞘嚴重程度和區(qū)域有所縮小。5空白對照組、EAE初期組、EAE高峰期組、EAE緩解期組相比:p38MAPK在各組小鼠脊髓組織腰膨大處表達情況無明顯差異。而p-p38MAPK在EAE高峰期及EAE緩解期蛋白表達含量較空白對照組及EAE初期組明顯上升(P0.05)。IL-17在EAE高峰期組表達,與其他各組相比明顯表達增多(P0.05)。6空白對照組、EAE高峰期組、SB203580組相比:p38MAPK在各組中的表達無明顯差異。p-p38MAPK、IL-17在SB203580組小鼠腰膨大處脊髓組織表達含量較EAE高峰期組相比表達下降(P0.05)。結論:1 P38MAPK可以通過Th17細胞介導的免疫炎癥機制參與小鼠EAE的發(fā)病。2 SB203580可以降低EAE小鼠的發(fā)病率、減輕發(fā)病時體重損失、神經(jīng)功能損傷的程度以及脊髓內(nèi)炎性細胞浸潤和白質(zhì)脫髓鞘的程度。3 SB203580作用的機制可能是通過抑制P38MAPK磷酸化激活,進而減輕EAE發(fā)病中的Th17細胞介導的免疫炎癥損傷從而發(fā)揮保護作用。
【關鍵詞】：多發(fā)性硬化 實驗性自身免疫性腦脊髓炎 C57BL/6小鼠 MOG35-55 SB203580 p-p38MAPK p38MAPK IL-17
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R744.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 1 材料13-16
• 2 試驗方法16-19
• 結果19-22
• 附圖22-32
• 附表32-33
• 討論33-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-40
• 綜述 p38 MAPK在多發(fā)性硬化和實驗性自身免疫性腦脊髓炎中的作用40-51
• 參考文獻47-51
• 致謝51-52
• 個人簡歷52

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