目的:研究mir-148a通過靶向調(diào)控重組人動(dòng)力蛋白輕鏈LC8 type 2（Recombinant Human Dynein Light Chain LC8 Type-2,DYNLL2）對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤（GBM）細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。方法:1、運(yùn)用生物信息學(xué)方法篩選預(yù)測(cè)mir-148a可能的靶基因。用常用的miRNA靶基因?qū)I(yè)的預(yù)測(cè)軟件如microrna.org、TargetScan、miRBase篩選出mir-148a的潛在靶基因,將三種軟件預(yù)測(cè)結(jié)果重復(fù)率高的基因作為候選基因。2、用qRT-PCR和Western Blot方法檢測(cè)DYNLL2在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平,觀察mir-148a是否影響DYNLL2的表達(dá)。比較DYNLL2基因在正常神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)差異性;同時(shí),在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中,觀察mir-148a過表達(dá)與抑制表達(dá)是否影響mir-148a的表達(dá)水平。3、運(yùn)用雙熒光素報(bào)告酶基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證DYNLL2是否為mir-148a靶基因。制備含有待檢測(cè)基因-Luc/Rluc的重組質(zhì)粒,將帶有Luc/Rluc標(biāo)記的報(bào)告基因和目的基因進(jìn)行共轉(zhuǎn)染,采用雙熒光素酶... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DYNLL2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系miR-148a過表達(dá)組與對(duì)照組中的表達(dá)與對(duì)照pre-miRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞比較;場(chǎng)<0.05,

３．２．２?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測(cè)ＤＹＮＬＬ２的蛋白表達(dá)水平結(jié)果??分別在正常的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以及膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)??驗(yàn)結(jié)果可知，ＤＹＮＬＬ２的蛋白水平在正常膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)量高于膠質(zhì)瘤細(xì)胞系??中的表達(dá)。各膠質(zhì)瘤細(xì)胞組與正常膠質(zhì)細(xì)胞組之間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ??＜０．０５），見圖５。為了進(jìn)一步驗(yàn)證ＤＹＮＬＬ２是ｍｉｒ－１４８ａ的一個(gè)真實(shí)祀基因，我們??在ｍｉｒ－１４８ａ過表達(dá)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞與抑制表達(dá)的祌經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中分別進(jìn)行??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ＤＹＮＬＬ２在蛋白質(zhì)翻譯水平的驗(yàn)證，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，在??神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)ｍｉｒ－１４８ａ之后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組要??低，而在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中抑制表達(dá)ｍｉｒ－１４８ａ后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表達(dá)量要高于??對(duì)照組，這種表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ＰＣ０．０５），見圖６、圖７。??４?－??

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本文編號(hào)：3422648