在生物體中,周期節(jié)律作為神經(jīng)、體液和免疫調節(jié)系統(tǒng)以外的另一個調節(jié)系統(tǒng)在機體正常功能的維持中起著非常重要的功能。周期節(jié)律的破壞會導致機體患病的幾率增加,包括癌癥的發(fā)生。正常的周期節(jié)律受到一組核心鐘基因通過轉錄-翻譯負反饋環(huán)路精細調控。已有研究指出,在哺乳動物中,約10%的基因受到鐘基因的調控,正因為鐘基因對多基因的調控,它可以參與到不同的細胞信號通路當中,在腫瘤中可以作為癌基因或抑癌基因發(fā)揮功能。MiRNAs是能在轉錄后調控基因表達的小非編碼RNA,它可以通過結合到靶基因的3’UTR抑制基因的翻譯或導致mRNA的降解,從而抑制靶基因的表達。MiRNA的改變在包括神經(jīng)膠質瘤在內的腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要功能。Xia et al.發(fā)現(xiàn)miR-124在膠質瘤中表達降低并證明了miR-124在細胞中通過作用于特定的靶基因如SNAl2抑制膠質瘤的增殖、遷移和成瘤。雖然鐘基因和miRNAs在腫瘤中的功能都已有相當多的研究,但是關于鐘基因和niRNAs的相互作用對神經(jīng)膠質瘤的影響還知之甚少。為了研究核心鐘基因CLOCK在神經(jīng)膠質瘤中的分子機理,我們首先檢測了16例不同級別的膠質瘤組織和兩例正常腦組織... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
實驗材料
    1. 主要化學試劑及實驗材料
    2. 主要儀器
    3. 工具酶、相對分子質量標準及試劑盒
    4. 抗體
    5. 質粒構建載體
    6. DNA引物和合成的小RNA
    7. 菌株
    8. 細胞株
    9. 細胞培養(yǎng)基
    10. 人正常腦組織和神經(jīng)膠質瘤樣本
    11. 軟件及網(wǎng)絡資源
實驗方法
    1. 組織及細胞總蛋白的提取
    2. 蛋白質濃度測定
        2.1 實驗原理
        2.2 試劑
        2.3 實驗步驟
    3. Western blotting蛋白印記實驗
        3.1 Western-blotting雜交用液
        3.2 Western-Blotting蛋白印跡雜交
    4. 細胞總RNA的提取
    5. 實時熒光定量PCR
        5.1 原理
        5.2 模板的制備
        5.3 實時定量PCR
    6. 克隆構建
        6.1 PCR反應
        6.2 PCR反應程序
        6.3 限制性內切酶酶切反應
        6.4 酶切產(chǎn)物回收
        6.5 連接
        6.6 轉化
        6.7 接菌
        6.8 質粒抽提
        6.9 酶切鑒定
        6.10 測序及結果分析
    7. 細胞培養(yǎng)及轉染
        7.1 細胞培養(yǎng)及傳代
        7.2 轉染
    8. MTT
        8.1 原理
        8.2 MTT溶液的配制
        8.3 操作步驟
    9. 克隆形成實驗
    10. TRANSWELL細胞遷移實驗
        10.1 實驗原理
        10.2 實驗步驟
    11. 細胞劃痕實驗
        11.1 實驗原理
        11.2 實驗步驟
    12. 熒光素酶報告基因實驗
        12.1 原理
        12.2 細胞樣品的準備
        12.3 熒光素酶基因活性檢測
    13. 數(shù)據(jù)處理和分析
結果
    1. 膠質瘤組織和膠質瘤細胞系中CLOCK蛋白表達檢測
    2. CLOCK對神經(jīng)膠質瘤細胞的生長的影響
    3. CLOCK對神經(jīng)膠質瘤細胞的遷移的影響
    4. miR-124在膠質瘤細胞中對CLOCK的靶向作用檢測
    5. MiR-124和CLOCK膠質瘤細胞中NF-κB的活性的影響
討論
    1. CLOCK蛋白在膠質瘤中高表達提示CLOCK可能在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮功能
    2. 生物鐘基因CLOCK在膠質瘤中發(fā)揮促進腫瘤細胞生長和遷移作用
    3. 膠質瘤中miR-124的低表達是CLOCK高表達的原因
    4. CLOCK對NF-κB活性的影響
    5. miR-124-CLOCK-NF-κB在神經(jīng)膠質瘤中的關系
小結
不足與展望
參考文獻
論文綜述
    參考文獻
附錄
個人簡歷
論文和會議摘要
致謝



本文編號：3419833