目的:有學(xué)者已經(jīng)報(bào)道在缺氧性損傷之前或之后基因沉默精氨酰-tRNA合成酶可使秀麗隱線蟲免于死亡,然而還沒有關(guān)于將基因沉默精氨酰-tRNA運(yùn)用于哺乳動物的缺血性卒中,其對缺血性腦損傷的保護(hù)體機(jī)制亦不清楚,在本實(shí)驗(yàn)中,我們研究了編碼精氨酰-tRNA合成酶的Rars基因,并檢測了沉默Rars基因在永久性大腦中動脈阻塞中的效果。方法:為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),在成年雄性SD大鼠右側(cè)大腦皮層注射shRNA腺病毒顆粒,以沉默產(chǎn)生精氨酰-tRNA合成酶的Rars基因,并以空病毒載體或磷酸鹽緩沖液為對照組。四天后,對大鼠實(shí)施永久性大腦中動脈閉塞處理,并檢測大鼠右側(cè)大腦皮層腺病毒注射區(qū)域精氨酰-tRNA合成酶水平的變化,通過檢測永久性大腦中動脈閉塞后第一天和第三天梗死體積、氧化應(yīng)激、血腦屏障、線粒體功能、葡萄糖代謝的變化,評價(jià)基因沉默精氨酰-tRNA合成酶對缺血性腦損傷的的影響。結(jié)果:注入大鼠大腦皮層的shRNA腺病毒成功地抑制了大鼠大腦皮質(zhì)精氨酰-tRNA合成酶的表達(dá)。我們觀察到,與對照組相比,基因沉默精氨酰-tRNA合成酶后,缺血大腦皮層的抗氧化應(yīng)激能力、線粒體功能和葡萄糖利用率均得到改善,而梗死體積并沒有... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)相關(guān)抗體
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)溶液的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.2 重組腺病毒立體定向注射
        2.2.3 大鼠大腦中動脈梗塞模型(MCAO)
        2.2.4 神經(jīng)功能缺損評分
        2.2.5 TTC染色
        2.2.6 RT-PCR法檢測檢測基因表達(dá)
        2.2.7 Western blot檢測蛋白表達(dá)水平
        2.2.8 免疫熒光染色
        2.2.9 氧化應(yīng)激測定
        2.2.10 ROS含量測定
        2.2.11 ATP含量測定
        2.2.12 核磁共振（MRI）
        2.2.13 透射電鏡（TEM）
        2.2.14 18F-FDG小動物PET成像
    2.3 數(shù)據(jù)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 重組腺病毒可有效抑制ArgRS的表達(dá)
    3.2 基因沉默ArgRS可改善缺血后神經(jīng)功能,但未能減少梗死體積
    3.3 基因沉默ArgRS減輕缺血后腦水腫
    3.4 基因沉默ArgRS減輕缺血后神經(jīng)細(xì)胞損傷
    3.5 基因沉默ArgRS增強(qiáng)了腦缺血損傷后的抗氧化活性
    3.6 基因沉默ArgRS減輕了腦缺血誘導(dǎo)的線粒體功能障礙
    3.7 基因沉默ArgRS減輕了腦缺血對血腦屏障的損傷
    3.8 基因沉默ArgRS可促進(jìn)缺血損傷后葡萄糖的利用
第4章 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間研究成果
附圖
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3412939