目的:研究DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1（DNA methyltransferases1,DNMT1）和甲基化-Cp G-結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白1（Methyl-Cp G-binding Domain protein 1,MBD1）對P19中DNA甲基化的動力學的影響。方法:（1）培養(yǎng)P19細胞,然后將攜帶MBD1短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA,sh RNA）#2號慢病毒載體和Scramble（無意義）sh RNA轉(zhuǎn)染到P19細胞中,給予嘌呤霉素（puromycin）篩選出已感染的細胞;利用熒光顯微鏡、qPCR驗證慢病毒載體對P19細胞MBD1敲減效率。（2）用MTT法檢測給予不同濃度（2.5、5、10、20和40μmol/L）的5-氮雜胞苷（5-Azacytidine,5-Aza）在24h、48h、72h對P19細胞的抑制率,篩選出最佳的5-Aza濃度,并利用qPCR和Western blotting篩選出最佳的作用時間。培養(yǎng)5-Aza處理的P19細胞,然后利用qPCR和Western blotting檢測MBD1、DNMT1、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3a（DNA methyltransfer... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DNA甲基化動力學

圖 3 P19 細胞感染慢病毒（Scramble、#2）熒光圖（100×）左：普光；右：熒光. P19 cells infected with lentivirus (Scramble, #2) fluorescence map (1 cells in bright field; Right: Expressing of GFP in P19 cells in the sam驗 MBD1 shRNA 慢病毒載體對 MBD1 的敲減率果顯示，Scramble、#2 慢病毒感染 P19 細胞后，Scrambl著性差異（P>0.05），表明慢病毒本身對 P19 細胞 MBD1；#2 組與 Scramble 組相比，MBD1 mRNA 水平降低，差1），#2 號病毒的 MBD1 敲減率可達 83.14%（Fig. 4）。

圖 3 P19 細胞感染慢病毒（Scramble、#2）熒光圖（100×）左：普光；右：熒光Figure 3. P19 cells infected with lentivirus (Scramble, #2) fluorescence map (100 ×)Left: P19 cells in bright field; Right: Expressing of GFP in P19 cells in the same view2.1.2 qPCR 檢驗 MBD1 shRNA 慢病毒載體對 MBD1 的敲減率qPCR 結(jié)果顯示，Scramble、#2 慢病毒感染 P19 細胞后，Scramble 組與對照組相比，無顯著性差異（P>0.05），表明慢病毒本身對 P19 細胞 MBD1 mRNA 水平無明顯影響；#2 組與 Scramble 組相比，MBD1 mRNA 水平降低，差異具有顯著性（P<0.01），#2 號病毒的 MBD1 敲減率可達 83.14%（Fig. 4）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Molecular mechanism of noradrenaline during the stress-induced major depressive disorder[J]. Kenjiro Seki,Satomi Yoshida,Manoj Kumar Jaiswal.  Neural Regeneration Research. 2018(07)
[2]Stem cells:a promising candidate to treat neurological disorders[J]. Chang-Geng Song,Yi-Zhe Zhang,Hai-Ning Wu,Xiu-Li Cao,Chen-Jun Guo,Yong-Qiang Li,Min-Hua Zheng,Hua Han.  Neural Regeneration Research. 2018(07)



本文編號：3404104