發(fā)布時間：2021-09-12 18:56

　　目的：為了明確poly （rC）-結合蛋白1（poly （rC） binding protein1, PCBP1）是否參與帕金森病（parkinson’s disease, PD）的病理進程,本研究利用6-OHDA損傷大鼠紋狀體的PD模型,通過腺相關病毒（rAAV）將PCBP1重組質粒轉染大鼠神經元細胞內表達,探討在帕金森病發(fā)生過程中與PCBP1可能存在的關系以及PCBP1對神經元的調節(jié)和保護作用。旨在為臨床運用基因治療PD提供可靠的理論基礎,并為PD的治療發(fā)現(xiàn)潛在的靶點和新的思路。材料與方法：SD雄性大鼠（200—250g）,用6-OHDA注射紋狀體雙側損傷的PD大鼠模型,隨機分為6-OHDA損傷組,6-OHDA+PCBP1腺相關病毒治療組和空病毒對照組。治療組在rAAV2-PCBP1-EGFP注射左側紋狀體手術一周后于雙側紋狀體注射6-OHDA24ug。一周后開始每周一次的行為學檢測,連續(xù)檢測六周。6-OHDA注射第七周時迅速處死動物。對照組在相同時間檢測行為和取材。1.用旋轉行為測轉儀檢測不同劑量6-OHDA對由阿撲嗎啡（Apomorphin Apo）誘發(fā)的大鼠異常旋轉行為；2.... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 帕金森病大鼠模型的建立及6-OHDA損傷劑量篩選
    1.1 實驗材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 藥品與試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2. 方法
        1.2.1 主要溶液配制
        1.2.2 動物分組及處理
        1.2.3 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學檢驗
    1.3 結果
        1.3.1 6-OHDA注射紋狀體出現(xiàn)由APO誘發(fā)的偏側旋轉行為
        1.3.2 6-OHDA注射紋狀體導致黑質DA能神經元漸進性缺失
    1.4 討論
        1.4.1 6-OHDA注射紋狀體制備的PD大鼠模型的選擇及其可能的機制
        1.4.2 6-OHDA注射紋狀對黑質DA能神經元的影響
        1.4.3 阿撲嗎啡誘發(fā)大鼠產生旋轉行為的機制和結果分析
        1.4.4 6-OHDA注射紋狀體對黑質DA能神經元數(shù)目的影響
第二部分 pSNAV1.0-pCBP1的構建
    2.1. 實驗材料
        2.1.1 藥品與試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 從pcDNA4c-PCBP1質粒上獲得目的基因
        2.2.2 產物純化
        2.2.3 純化產物酶切
        2.2.4 pSNAV1.0質粒的擴增
        2.2.5 連接構建成pSNAV1.0-pCBP1
        2.2.6 所得pSNAV1.0-pCBP1重組質粒產物測序
    2.3 結果
        2.3.1 PCBP1目的條帶的擴增pcDNA 4c-PCBP1
        2.3.2 pSNAVl.0酶切產物鑒定
        2.3.3 連接產物轉化大腸桿菌DH5 α后進行克隆篩選
        2.3.4 pSNAV1.0-PCBP1重組質粒酶切鑒定
        2.3.5 pSNAV1.0-pCBP1重組質粒測序
    2.4 討論
第三部分 rAAV2-PCBP1-EGFP病毒包裝
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
        3.2.1 載體細胞株的建立
        3.2.2 rAAV2-PCBP1-EGFP的大規(guī)模制備
        3.2.3 rAAV2-PCBP1-EGFP的純化及純度檢測
        3.2.4 rAAV2-PCBP1-EGFP的目的基因的PCR鑒定
        3.2.5 rAAV2-PCBP1-EGFP的滴度測定
        3.2.6 滴度測定樣品處理
        3.2.7 陽性對照質粒的處理
    3.3 結果
        3.3.1 rAAV2-PCBP1-EGFP經負染后用電子顯微鏡觀察
        3.3.2 rAAV2-PCBP1-EGFP的目的基因的PCR鑒定
        3.3.3 rAAV2-PCBP1-EGFP的滴度測定
    3.4 討論
第四部分 PCBP1對帕金森大鼠的影響
    4.1 實驗材料
        4.1.1 行為學測試TRUSCAN
        4.1.2 免疫組化
        4.1.3 western
    4.2 實驗方法
        4.2.1 rAAV2-PCBP1-EGFP表達時效和劑量的摸定
        4.2.2 rAAV2-PCBP1-EGFP注射紋狀體對帕金森大鼠的治療效應
    4.3. 結果
        4.3.1 rAAV2-PCBP1-EGFP 表達時效和劑量
        4.3.2 行為學測試結果
        4.3.3 rAAV2-PCBP1-EGFP注射紋狀體后大鼠腦內PCBP1的表達
        4.3.4 Western-blot檢測中腦中TH,HSP70
    4.4 討論
        4.4.1 rAAV2-PCBP1-EGFP在大鼠腦內的表達
        4.4.2 模型的建立原則
        4.4.3 rAAV2-PCBP1-EGFP對PD大鼠行為的影響
        4.4.4 PCBP1的表達量的變化以及rAAV2-PCBP1-EGFP對HSP70的上調作用
結論
附錄：文章縮略詞一覽表
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
個人簡歷
致謝
碩士期間發(fā)表文章


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3394767