膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見，致死率最高的惡性腫瘤，具有高度的異型性、較強(qiáng)的侵襲能力及對(duì)放化療抵抗的特點(diǎn)，死亡率高居顱腦疾病的第二位。由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，因此，目前仍缺乏針對(duì)膠質(zhì)瘤有效的治療方法，惡性程度最高的膠質(zhì)瘤中位生存期只有14.6個(gè)月，5年生存率僅為9.8%，因此，探索針對(duì)膠質(zhì)瘤的有效治療方法是神經(jīng)外科學(xué)界亟待解決的醫(yī)學(xué)難題，而通過膠質(zhì)瘤致病機(jī)制的研究有望為膠質(zhì)瘤的治療提供新的輔助治療手段。近年的多項(xiàng)研究證實(shí)，膠質(zhì)瘤中存在一群數(shù)量少但較特殊的細(xì)胞，這群細(xì)胞具有干細(xì)胞特征，被稱為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞（Glioma stem cells，GSCSs），這些細(xì)胞具有如下特點(diǎn)：可快速增殖，具有多向分化的潛能、容易體外成瘤、對(duì)放化療不敏感。研究認(rèn)為，這群細(xì)胞的存在是膠質(zhì)瘤治療效果差和容易復(fù)發(fā)的主要原因。因此除了目前常規(guī)針對(duì)非膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的聯(lián)合治療手段外，研究調(diào)控GSCs的關(guān)鍵分子和主要的信號(hào)通路，尋找靶向消除GSCs的有效治療方法可為膠質(zhì)瘤的治療提供新的輔助治療手段。Notch信號(hào)途徑在進(jìn)化上高度保守，在細(xì)胞增殖、分化、命運(yùn)決定方面有著非常重要作用。研究表明，Notch信號(hào)途徑在膠質(zhì)瘤中處... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
Abstract
前言
文獻(xiàn)回顧
    第一部分 膠質(zhì)瘤與膠質(zhì)瘤干細(xì)胞
    第二部分 NOTCH 信號(hào)通路
    第三部分 MICRORNAS（微 RNAS，MIRNAS）
第一部分 FHL1A 在膠質(zhì)瘤中低表達(dá)及其對(duì)膠質(zhì)瘤增殖的抑制作用
    實(shí)驗(yàn)一：FHL1A 在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)分析
        1 材料
            1.1 膠質(zhì)瘤標(biāo)本來源
            1.2 主要試劑
            1.3 常用緩沖液
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 Western Blot
            2.2 免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）
        3 結(jié)果
            3.1 FHL1 在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)低于相應(yīng)瘤周正常腦組織
            3.2 在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與膠質(zhì)瘤級(jí)別及預(yù)后相關(guān)
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)二、FHL1A 可抑制膠質(zhì)瘤的增殖
        1 材料
            1.1 細(xì)胞來源
            1.2 主要試劑
            1.3 常用緩沖液系統(tǒng)
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 Western blot
            2.2 流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析
            2.3 MTT 法觀察細(xì)胞的增殖
            2.4 FHL1A 過表達(dá)及干涉慢病毒載體的構(gòu)建
            2.5 FHL1A 過表達(dá)及干涉慢病毒載體包裝
            2.6 慢病毒感染穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
        3 結(jié)果
            3.1 FHL1A 在 U251 中有表達(dá)，而在 U87 中則無表達(dá)
            3.2 構(gòu)建了 U87 過表達(dá) FHL1A 及 U251 干涉 FHLA 的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系
            3.3 FHL1A 可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的增殖（MTT 法）
            3.4 FHL1A 可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的增殖（流式細(xì)胞儀檢測(cè)）
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)三、FHL1A 通過抑制 PI3K/AKT 信號(hào)通路抑制膠質(zhì)瘤增殖
        1 材料
            1.1 細(xì)胞來源
            1.2 主要試劑
            1.3 常用緩沖液系統(tǒng)
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 Western blot
            2.2 流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析
            2.3 MTT 法觀察細(xì)胞的增殖
        3 結(jié)果
            3.1 過表達(dá) FHL1A 可抑制 AKT 的磷酸化，而抑制 FHL1A 可促進(jìn)其磷酸化
            3.2 PI3K/AKT 通路特異性抑制劑 LY294002 抑制劑可抑制 FHL1A 對(duì) U251 增殖的促進(jìn)作用（MTT 法）
            3.3 3.3 PI3K/AKT 通路特異性抑制劑 LY294002 抑制劑可抑制 FHL1A 對(duì)U251 增殖的促進(jìn)作用（流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期）
        4 討論
第二部分 MICRORNA-342-5P 調(diào)控膠質(zhì)瘤干細(xì)胞增殖及分化作用研究
    實(shí)驗(yàn)一、microRNA-342-5p 在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與級(jí)別的關(guān)系
        1 材料
            1.1 膠質(zhì)瘤標(biāo)本來源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 膠質(zhì)瘤標(biāo)本 RNA 的提取，定量及反轉(zhuǎn)錄
            2.2 miR-342-5p 分子表達(dá)的檢測(cè)
        3 結(jié)果
            3.1 miRNA 的芯片結(jié)果由本實(shí)驗(yàn)室提供
            3.2 miR-342-5p 在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)低于相應(yīng)瘤周正常腦組織
            3.3 miR-342-5p 的表達(dá)與膠質(zhì)瘤級(jí)別呈負(fù)相關(guān)關(guān)系
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)二 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞（GSCSs）的原代培養(yǎng)及鑒定
        1 材料
            1.1 細(xì)胞來源
            1.2 主要試劑
            1.3 常用配置試劑和培養(yǎng)液
            1.4 主要儀器
        2 方法
            2.1 膠質(zhì)瘤樣品的獲取
            2.2 GSCs 的原代培養(yǎng)
            2.3 GSCs 的分化培養(yǎng)
            2.4 免疫熒光染色
            2.5 用于 GSCs 培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤患者臨床資料
        3 結(jié)果
            3.1 GSCs 克隆球原代培養(yǎng)及鑒定
            3.2 GSCs 多向分化潛能及免疫熒光鑒定
            3.3 膠質(zhì)瘤病人資料的整理收集
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)三 miR-342-5p 在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與非干細(xì)胞表達(dá)差異及 Notch 信號(hào)通路對(duì)miR-342-5p 表達(dá)的調(diào)控
        1 材料
            1.1 細(xì)胞來源
            1.2 主要試劑
            1.3 常用配置試劑和培養(yǎng)液
            1.4 主要儀器
        2 方法
            2.1 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及非干細(xì)胞 RNA 的提取，定量及反轉(zhuǎn)錄
            2.2 實(shí)時(shí)定量 PCR
            2.3 原代 GSCs 培養(yǎng)
            2.4 原代普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞的培養(yǎng)
        3 結(jié)果
            3.1 miR-342-5p 及 Notch 信號(hào)途徑效應(yīng)分子 Hes1、Hes5 在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與非干細(xì)胞表達(dá)差異
            3.2 Notch 信號(hào)途徑可抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中 miR-342-5p 的表達(dá)
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)四 miR-342-5p 對(duì) GSCSs 生物學(xué)功能的影響
        1 材料
            1.1 細(xì)胞來源
            1.2 主要試劑
            1.3 緩沖液和培養(yǎng)基
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 GSCs 的原代培養(yǎng)
            2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.3 miR-342-5p 對(duì) GSCs 增殖能力影響的觀察
            2.4 miR-342-5p 對(duì) GSCs 分化影響的觀察
            2.5 反轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)定量 PCR
            2.6 免疫熒光染色
        3 結(jié)果
            3.1 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的分化（光鏡觀察）
            3.2 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的增殖（免疫熒光結(jié)果）
            3.3 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的分化（免疫熒光結(jié)果）
            3.4 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的分化（實(shí)時(shí)定量 PCR）
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)五 miR-342-5p 通過癌基因 Pokemon 影響 GSCSs 的生物學(xué)功能
        1 材料
            1.1 細(xì)胞來源
            1.2 主要試劑
        2 方法
            2.1 pokemon3’UTR 區(qū) pGL3 promoter 報(bào)告基因載體的構(gòu)建
            2.2 pcDNA6.2-miR-342-5p 載體的構(gòu)建
            2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.4 報(bào)告基因檢測(cè)
            2.5 細(xì)胞 RNA 的提取，定量，反轉(zhuǎn)錄
            2.6 細(xì)胞蛋白提取，定量，westernblot
        3 結(jié)果
            3.1 miR-342-5p 下游靶基因的預(yù)測(cè)
            3.2 miR-342-5p 對(duì) pokemon（ZBTB-7A）的調(diào)控作用
        4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pokemon蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 趙智宏,王勝發(fā),張鐵娃.  中國(guó)肺癌雜志. 2007(06)
[2]Isolation and Identification of Cancer Stem-Like Cells from Murine Melanoma Cell Lines[J]. Jun Dou 1,4, ,Meng Pan 1,2,4 ,Ping Wen 1 ,Yating Li 1 ,Quan Tang 1 ,Lili Chu 1 ,Fengshu Zhao 1 , Chuilian Jiang 1 ,Weihua Hu 1 ,Kai Hu 1 and Ning Gu 3,1Department of Pathogenic Biology and Immunology,School of Basic Medical Science,Southeast University,Nanjing 210009,China; 2Jiangsu Province Hospital,Nanjing 210029,China; 3 Biological Science of Medical Engineering,Southeast University,Nanjing 210096,China; 4These authors contributed equally to the study;.  Cellular & Molecular Immunology. 2007(06)
[3]Detection of tumor stem cell markers in pancreatic carcinoma cell lines[J]. Monika Olempska,Patricia Alice Eisenach,Ole Ammerpohl,Hendrik Ungefroren,Fred Fandrich,Holger Kalthoff.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2007(01)



本文編號(hào)：3394429