目的：1.初步分析正常DMPK等位基因CTG序列拷貝數(shù)的分布特點(diǎn)，豐富對(duì)中國(guó)漢族人CTG序列多態(tài)性的認(rèn)識(shí)。2.基于芯片平臺(tái)篩選強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良1型患者肌肉組織中異常表達(dá)的microRNA和基因，通過(guò)生物信息學(xué)方法分析差異microRNA與差異基因間的相互作用關(guān)系，探索microRNA在DM1中參與的重要功能和通路，為闡明microRNA在DM1發(fā)病機(jī)制中的作用提供更直接的科學(xué)依據(jù)。方法:1.采用三重引物PCR（triplet primed PCR, TP-PCR）對(duì)53名臨床擬診為DM1的患者及8名無(wú)癥狀親屬行基因診斷，分析正常DMPK等位基因CTG拷貝數(shù)的分布趨勢(shì)。2.選取4例來(lái)自DM1患者的活檢肌肉標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)組，4例來(lái)自骨科手術(shù)病人的正常肌肉標(biāo)本為對(duì)照組，通過(guò)RNA提取、microRNA芯片和全轉(zhuǎn)錄本芯片檢測(cè)，篩選出兩組間的差異microRNA和差異基因；利用TargetScan6.2預(yù)測(cè)差異microRNA的靶基因，并對(duì)差異基因進(jìn)行功能及信號(hào)通路的顯著性分析；將顯著性功能和信號(hào)通路所對(duì)應(yīng)的差異基因與靶基因進(jìn)行對(duì)比，找出交集基因，探索其與microRNA間的相互作用關(guān)系。結(jié)果:1.... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DM1的RNA毒性致病機(jī)制

推動(dòng) microRNA 研究的飛速發(fā)展做出了巨大的icroRNA 有 1600 個(gè)前體和 2042 個(gè)成熟體(m合成包括 microRNA 基因的轉(zhuǎn)錄、核內(nèi)加工、程。首先，microRNA 基因在 RNA 聚合酶Ⅱ物(pri-microRNA)，然后在 Drosha/DCGR8 作t、含有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體 microRNA(pre-microRP 轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞核，經(jīng)過(guò) Dicer 的第二次剪切產(chǎn)些成熟 microRNA 可與其他蛋白質(zhì)一起組成 ilencing complex, RISC)，通過(guò)核酸序列互補(bǔ)結(jié) 種機(jī)制負(fù)向調(diào)控基因表達(dá)：當(dāng) microRNA 和靶，靶基因 mRNA 降解；當(dāng)不完全互補(bǔ)時(shí)，則RNA 的水平(圖 1-2)。

圖 2-1 反應(yīng)二原理圖表 1-2 TP-PCR 反應(yīng)程序[1, 2]應(yīng)步驟 溫度(℃) 時(shí)間(秒) 循環(huán)變性 94 240 1變性 95 60退火 60 603延伸 72 120末延伸 72 600 1離檢測(cè)：PCR 產(chǎn)物使用 ABI 公司的 3100 測(cè)序儀進(jìn)行后續(xù)處理。峰出現(xiàn)在 60-63 堿基處，最大片段長(zhǎng)度峰不超過(guò) 160 堿基(圖 2


本文編號(hào)：3391687