本文關(guān)鍵詞：RA與WNT信號通路聯(lián)合調(diào)節(jié)神經(jīng)元前體細(xì)胞分化的體外研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)是一種具有自我更新,自我增殖和分化成多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞潛力的未分化的細(xì)胞,經(jīng)過神經(jīng)元前體細(xì)胞(neural progenitor cells,NPCs)和膠質(zhì)前體細(xì)胞階段,最終分化為神經(jīng)元、星型膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。體外培養(yǎng)NPCs時(shí),表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)具有促進(jìn)增殖的作用,并最終使NPCs增殖形成具有分化潛能的神經(jīng)球;若撤去促進(jìn)增殖的因素時(shí),神經(jīng)球?qū)只缮窠?jīng)元、星型膠質(zhì)細(xì)胞或少突膠質(zhì)細(xì)胞;因此對于NPCs研究的重點(diǎn)就在如何控制NPCs向預(yù)定的細(xì)胞方向分化,并達(dá)到對疾病治療的目的。在神經(jīng)球的培養(yǎng)中,許多細(xì)胞內(nèi)源性的和外源性的因素均可調(diào)節(jié)NPCs的增殖、遷移和分化;NPC培養(yǎng)技術(shù)為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究提供了一個(gè)較為理想和可行的細(xì)胞培養(yǎng)模型;通過對胚胎、胎兒或者成年機(jī)體獲得的NSCs予以適當(dāng)誘導(dǎo),然后進(jìn)行移植治療,對于損傷或疾病所導(dǎo)致的大腦和脊髓的神經(jīng)元變性或許會得到逆轉(zhuǎn)。維甲酸(retinoic acid,RA)是一個(gè)由維生素A轉(zhuǎn)化而來的親脂性的小分子化合物,在胚胎形成,發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的小鼠胚胎干細(xì)胞,在給予RA刺激時(shí)會促進(jìn)干細(xì)胞增殖;對于發(fā)育中的中樞神經(jīng)系統(tǒng),RA促進(jìn)干細(xì)胞向著膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞方向的分化以及少突膠質(zhì)-gaba能神經(jīng)元方向的分化。wnt信號通路是器官發(fā)育過程中高度保守的信號通路。不論是在胚胎的神經(jīng)發(fā)生,還是在成年神經(jīng)系統(tǒng)的干細(xì)胞,wnt信號均具有調(diào)節(jié)npcs分化和增殖的作用;對于神經(jīng)變性性和神經(jīng)退行性疾病,wnt信號同樣扮演著十分重要的角色;通過對體外培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞進(jìn)行wnt配體刺激,結(jié)果發(fā)現(xiàn)wnt除了能促進(jìn)干細(xì)胞增殖和自我更新,促進(jìn)神經(jīng)球的形成和增長之外,還具有促進(jìn)其向gaba能神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞方向的分化的潛能。在發(fā)育中,ra和wnt信號通常作為腹、背兩極的形態(tài)發(fā)生信號,協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)著組織的生長和肝細(xì)胞的分化,因此,在神經(jīng)干細(xì)胞中,二者有可能協(xié)調(diào)發(fā)揮作用,調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化。但有關(guān)ra和wnt信號相互影響及其相互之間在神經(jīng)干細(xì)胞的增殖與分化中相互作用機(jī)制的研究目前尚未見報(bào)道�；诖�,本實(shí)驗(yàn)擬在體外培養(yǎng)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的基礎(chǔ)上,研究兩者共同干預(yù)nscs時(shí),會對nscs的自我更新和增殖產(chǎn)生什么樣的影響?第一部分ra和wnt信號對神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響1.方法:培養(yǎng)離體胚胎神經(jīng)干細(xì)胞;在神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化下,進(jìn)行ra處理、wnt3a處理以及兩者聯(lián)合;采用brdu示蹤方法檢測神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的變化;采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和westernblot技術(shù)觀察少突膠質(zhì)-gaba能神經(jīng)元共同前體細(xì)胞標(biāo)記蛋白dlx2,少突膠質(zhì)前體細(xì)胞標(biāo)記蛋白ng2,gaba能神經(jīng)元標(biāo)記蛋白gad67,神經(jīng)元特異性標(biāo)記蛋白tuj1,以及星型膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記蛋白gfap表達(dá)的變化。2.結(jié)果:ra和wnt3a單獨(dú)處理時(shí),均可顯著增加brdu陽性的神經(jīng)干細(xì)胞、gaba能神經(jīng)元的gad67陽性的細(xì)胞的數(shù)目以及tuj1陽性的神經(jīng)元細(xì)胞(p0.05);wnt3a可增加少突膠質(zhì)-gaba能神經(jīng)元的共同前體細(xì)胞即dlx2陽性和少突膠質(zhì)前體細(xì)胞即ng2陽性的細(xì)胞和細(xì)胞數(shù)量(p0.05),然而ra抑制dlx2和ng2的表達(dá)(p0.05)。ra和wnt3a聯(lián)合使用時(shí),抑制神經(jīng)干細(xì)胞增殖,降低dlx2,ng2,gad67以及tuj1神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)。在神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞方向的分化時(shí),ra和wnt3a均不同程度地抑制神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞方向的分化(p0.05),而兩者聯(lián)合使用時(shí)gfap陽性的星型膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目則有回到了對照組的水平。3.結(jié)論:ra和wnt3a均可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和向少突膠-gaba能神經(jīng)元方向的分化的作用,同時(shí)抑制其向星形膠質(zhì)細(xì)胞方向的分化;ra和wnt3a聯(lián)合使用時(shí),神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化能力又恢復(fù)到了對照組的水平,提示ra和wnt信號之間可能存在相互拮抗的特性。第二部分ra和wnt信號之間的相互作用及β-catenin對ra/wnt相互拮抗作用的挽救1.方法:培養(yǎng)離體胚胎神經(jīng)干細(xì)胞,采用過表達(dá)β-catenin的慢病毒感染神經(jīng)干細(xì)胞,然后進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化,如實(shí)驗(yàn)第一部分方法所述采用brdu增殖實(shí)驗(yàn)檢測神經(jīng)干細(xì)胞自我增殖能力的變化,采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測dlx2,ng2,gad67以及gfap的變化,采用westernblot技術(shù)檢測ra信號通路和wnt信號通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)。2.結(jié)果:ra可上調(diào)wnt/β-catenin信號通路神經(jīng)干細(xì)胞中的關(guān)鍵分子β-catenin,以及wnt信號的靶基因axin2和cyclind1的表達(dá);wnt3a在ra信號通路中則可上調(diào)ra降解過程中的關(guān)鍵酶cyp26b1和下調(diào)ra信號的胞內(nèi)關(guān)鍵分子raldh3的表達(dá)。ra和wnt3a共同刺激抑制β-catenin的表達(dá)。與ra/wnt3a聯(lián)合刺激相比,β-catenin過表達(dá)刺激可明顯增加少突膠質(zhì)細(xì)胞-gaba能神經(jīng)元的共同前體細(xì)胞即dlx2陽性的細(xì)胞,少突膠質(zhì)前體細(xì)胞即ng2陽性的細(xì)胞和gaba能神經(jīng)元的gad67陽性的細(xì)胞的數(shù)目以及tuj1陽性的神經(jīng)元細(xì)胞(p0.05)和brdu標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞(p0.05);而對于神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞方向的分化出現(xiàn)一定程度的下降,提示β-catenin過表達(dá)可挽救ra與wnt信號在神經(jīng)干細(xì)胞中的相互拮抗效應(yīng)。。3.結(jié)論:RA和Wnt3a之間互相拮抗的機(jī)制可能通過胞內(nèi)β-catenin的作用實(shí)現(xiàn),進(jìn)而抑制神經(jīng)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)-GABA能神經(jīng)元方向的分化,而促進(jìn)其向星型膠質(zhì)細(xì)胞方向的分化。由于Wnt3a抑制RA信號通路中Raldh3的合并促進(jìn)cyp 26B1的表達(dá),Raldh3和cyp 26B1在R與和Wnt3a的相互拮抗中的作用有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)干細(xì)胞 神經(jīng)元前體細(xì)胞 維甲酸 Wnt3a Wnt/β-catenin信號 RA信號 少突膠質(zhì)-GABA能神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-27
• 第一部分RA和Wnt信號對神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響27-42
• 1 材料27-28
• 2 方法28-33
• 3 結(jié)果33-39
• 4 討論39-42
• 第二部分RA和Wnt信號之間的相互作用及 β-catenin對RA/Wnt相互拮抗作用的挽救42-55
• 1 材料43-44
• 2 方法44-47
• 3 結(jié)果47-52
• 4 討論52-55
• 小結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-64
• 個(gè)人簡歷和研究成果64-65
• 致謝65

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1 楊樹源,安沂華;再述神經(jīng)干細(xì)胞的研究及其應(yīng)用前景[J];中華神經(jīng)外科雜志;2002年05期

2 黃鎮(zhèn),金國華,徐慧君;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2002年01期

3 朱曉峰;神經(jīng)干細(xì)胞研究的幾個(gè)問題[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2002年05期

4 張敬軍,夏作理,劉焯霖;神經(jīng)干細(xì)胞的研究[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年02期

5 季慶;神經(jīng)干細(xì)胞的研究近況[J];醫(yī)學(xué)綜述;2002年05期

6 田玲;;蛋白可促使神經(jīng)干細(xì)胞移動[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);2002年09期

7 張敬軍,劉焯霖;神經(jīng)干細(xì)胞的研究[J];中國病理生理雜志;2003年04期

8 張國福,林建華;神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];福建中醫(yī)藥;2003年03期

9 劉岳文,杜永紅,王可,徐正順;神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

10 王任直;張波;竇萬臣;鄭彤;;神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用的理論基礎(chǔ)和策略[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;2003年09期

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1 王華;王文輝;林蕾;;神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展及前景展望[A];第六屆西部介入放射學(xué)術(shù)會議寧夏醫(yī)學(xué)會放射學(xué)分會第四屆年會介入放射學(xué)新技術(shù)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

2 戴毅;韓忠朝;;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展及臨床前景展望[A];中國解剖學(xué)會第八屆組織學(xué)與胚胎學(xué)專業(yè)青年研討會論文集[C];2004年

3 孫一睿;胡錦;王爾松;奚才華;姚海軍;;單層黏附培養(yǎng)技術(shù)在哺乳動物神經(jīng)干細(xì)胞體外穩(wěn)定增殖和多向分化中的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

4 劉佳梅;;腦內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移[A];中國解剖學(xué)會第十一屆全國組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

5 魏勇;應(yīng)大君;張偉;董世武;;幼齡家豬腦SVZ神經(jīng)干細(xì)胞的分離與鑒定[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

6 司銀楚;朱培純;程龍;吳海霞;許紅;;去皮層血管對成年大鼠腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

7 李學(xué)坤;郭安臣;左萍萍;;胎鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及亞克隆[A];中國藥理學(xué)會第十屆全國神經(jīng)學(xué)術(shù)會議暨浙江省藥理學(xué)會2002年年會論文摘要集[C];2002年

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1 胡德榮;“抑制蛋白”可控制神經(jīng)干細(xì)胞提前分化[N];健康報(bào);2007年

2 孫國根　白毅;靈長類腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2011年

3 孫國根;阻礙卒中后神經(jīng)干細(xì)胞再生的“元兇”被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

4 ;我國科學(xué)家成功地在體外培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

5 沈麗 付鈺;神奇的神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日報(bào);2002年

6 時(shí)仲省 高思敏 劉春陽;河南醫(yī)大成功培養(yǎng)人胚神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

7 梓華;神經(jīng)干細(xì)胞可治惡性腦癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 許琦敏;腦損傷修復(fù)治療又有新希望[N];文匯報(bào);2007年

9 北京市神經(jīng)外科研究所 北京天壇醫(yī)院 王忠誠邋院士;神經(jīng)修復(fù)的生力軍——神經(jīng)干細(xì)胞[N];健康報(bào);2008年

10 孫國根;神經(jīng)干細(xì)胞并非“全能制造者”[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

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1 張帆;Miranda磷酸化調(diào)控果蠅神經(jīng)干細(xì)胞不對稱分裂的機(jī)制[D];浙江大學(xué);2014年

2 張坤;極化巨噬細(xì)胞與脊髓來源神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合移植對脊髓損傷治療作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 褚天慈;血管生成素2對胎鼠腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用及其分子機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 胡園園;AF1q在神經(jīng)發(fā)育中的功能及調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 郭立云;獼猴胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)、腦內(nèi)移植及其在青光眼玻璃體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸—探索性研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

6 任永娟;材料調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的研究[D];清華大學(xué);2009年

7 曹翠麗;大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及向神經(jīng)元的誘導(dǎo)分化[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

8 周虎田;骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 段發(fā)亮;神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)、增殖、遷移和分化的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

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1 李武雄;MK-801在谷氨酸-Shh信號通路中的阻斷作用[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2014年

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9 楊明;谷氨酸/NMDA1、Shh介導(dǎo)的成體NSC增殖分化信號通路的研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

10 甘小鳳;弓形蟲抑制Wnt/β-catenin通路干擾C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的分化[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

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