本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）誘導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN229細(xì)胞株建立膠質(zhì)細(xì)胞炎性激活的模型，觀察在SHH通路阻斷劑cyclopamine阻斷SHH通路的情況下，LN229細(xì)胞激活及炎癥因子的表達(dá)。并一步觀察LPS刺激下阻斷SHH通路對膠質(zhì)-神經(jīng)元共培養(yǎng)下神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。最后觀察LPS刺激下阻斷SHH通路對LN229細(xì)胞帕金森相關(guān)基因Nurr1的表達(dá)的影響，為臨床上治療帕金森病提供新策略。本實(shí)驗(yàn)分三部分：第一部分LN229細(xì)胞炎癥激活模型的建立及阻斷SHH通路對炎癥因子表達(dá)的影響目的：應(yīng)用LPS刺激LN229細(xì)胞，建立膠質(zhì)細(xì)胞激活的細(xì)胞模型，在此基礎(chǔ)上探討cyclopamine阻斷SHH通路對膠質(zhì)激活的影響。方法：運(yùn)用CCK-8法檢測所用濃度LPS及cyclopamine對LN229的細(xì)胞毒性；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測不同時(shí)間點(diǎn)LPS誘導(dǎo)下IL-1β mRNA的表達(dá)變化以確定LPS使用濃度。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果運(yùn)用LPS刺激LN229細(xì)胞建立膠質(zhì)細(xì)胞激活模型，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測炎癥因子iNOS、TNFα、IL-1β及膠質(zhì)細(xì)胞激活相關(guān)基因caspas... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文對照表
前言
第一部分 LN229細(xì)胞炎癥激活模型的建立及阻斷SHH通路對炎癥因子表達(dá)的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 主要試劑的配制
        1.5 PCR引物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞處理及分組
        2.3 CCK-8法檢測細(xì)胞存活
        2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    結(jié)果
        1. LPS對LN229細(xì)胞的毒性
        2. cyclopamine對LN229細(xì)胞的毒性
        3. LPS刺激LN229細(xì)胞的作用時(shí)間
        4. LPS刺激下LN229細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)
        5. LPS對LN229細(xì)胞caspase8、caspase3表達(dá)的影響
        6. LPS對LN229細(xì)胞SHH信號通路的激活
        7. cyclopamine增加LPS誘導(dǎo)下LN229細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)
第二部分 阻斷SHH通路增強(qiáng)LPS誘導(dǎo)下神經(jīng)細(xì)胞的損害
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞處理及分組
        2.3 CCK-8法檢測細(xì)胞存活
    結(jié)果
        1. LPS對神經(jīng)細(xì)胞的毒性
        2. Cyclopamine對神經(jīng)細(xì)胞的毒性
第三部分 cyclopamine對脂多糖誘導(dǎo)下LN229細(xì)胞中帕金森病相關(guān)基因Nurr1的表達(dá)的影響
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞處理和分組
        2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.4 細(xì)胞總蛋白的提取
        2.5 蛋白濃度測定
        2.6 免疫印跡法檢測蛋白含量
    結(jié)果
        1. LPS刺激下LN229細(xì)胞Nurr1的表達(dá)
        2. Cyclopamine對LN229細(xì)胞Nurr1表達(dá)的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述：Sonic hedgehog信號通路在帕金森病中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Sonic Hedgehog蛋白在帕金森病模型大鼠黑質(zhì)中的表達(dá)[J]. 何穗芬,董為人,郝彥利,龍大宏,孫衛(wèi)文,王富強(qiáng),王海紅,郭家松,宋建武,陳英華.  解剖學(xué)研究. 2008(05)



本文編號：3390960