研究目的:研究表明神經(jīng)炎癥和自噬功能缺陷可能參與了帕金森病發(fā)病機制。以往的研究主要聚焦于多巴胺神經(jīng)元自噬活性的變化及其調(diào)控,很少有研究關注小膠質(zhì)細胞自噬是否參與或介導帕金森病發(fā)病機制,尤其是帕金森病炎性機制。因此,本論文重點研究小膠質(zhì)細胞自噬對α-突觸核蛋白誘導的神經(jīng)炎癥的調(diào)控作用與分子機制。研究方法:本論文以C57BL/6小鼠原代小膠質(zhì)細胞及BV2細胞株為研究對象。以不同濃度（2.5、5和10mg/ml）人源重組α-synuclein蛋白單體作用于BV2或原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞中,在不同時間點（1h、3h、6h）通過免疫印跡測定LC3II、P62、Beclin1和mTOR等自噬相關蛋白及調(diào)控分子的表達變化,通過熒光顯微鏡計數(shù)LC3點的變化;收集培養(yǎng)48h后的過表達野生型α-synuclein蛋白的PC12細胞上清,將其轉(zhuǎn)移到BV2或原代小膠質(zhì)細胞中,以上述類似方法研究細胞自噬和自噬流量的變化,驗證α-synuclein對小膠質(zhì)細胞內(nèi)自噬活性的影響。通過給予溶酶體抑制劑Baf A1或自噬激動劑Rapamycin探究α-synuclein調(diào)控自噬的分子機制。以自噬相關基因Atg5 siRN... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

AMPK/mTOR通路介導α-synuclein對自噬的抑制作用圖A.免疫印跡測定α-synuclein條件培養(yǎng)基作用BV2細胞24h內(nèi)ATG5、ATG7及Beclin1表

圖 5：小膠質(zhì)細胞自噬調(diào)控神經(jīng)炎癥反應圖 A-B. 免疫印跡測定 TLR4/NFκ B 通路蛋白及炎癥小體 NLRP3 蛋白表達，α -synuclein 激活 TLR4/NFκ B 通路及NLRP3的形成,n=4；圖C-E. Q-PCR 及ELISA 檢測炎癥因子表達水平，n=3-5；圖 F. 免疫印跡測定調(diào)控自噬 NLRP3 蛋白水平。n=3-5.One way ANOVA.*P<0.05，**P<0.01***P<0.001.6. 小膠質(zhì)細胞自噬調(diào)控細胞吞噬能力研究表明，α-synuclein 激活小膠質(zhì)細胞主要通過表面受體分子如 CD36、TLRs、MHCII 等，其一通過受體偶聯(lián)的信號通路激活小膠質(zhì)細胞、誘導炎癥相關分子的生成與釋放，其二是識別結(jié)合并介導 α-synuclein 被吞噬。那么小膠質(zhì)細胞自噬是否影響其吞噬能力呢？本論文使用小膠質(zhì)細胞吞噬熒光微球的數(shù)量來判定其吞噬能力，首先我們利用自噬誘導劑 Rapamycin 以及 siRNA 敲減 atg5，以增


本文編號：3386106