研究目的:研究表明神經(jīng)炎癥和自噬功能缺陷可能參與了帕金森病發(fā)病機(jī)制。以往的研究主要聚焦于多巴胺神經(jīng)元自噬活性的變化及其調(diào)控,很少有研究關(guān)注小膠質(zhì)細(xì)胞自噬是否參與或介導(dǎo)帕金森病發(fā)病機(jī)制,尤其是帕金森病炎性機(jī)制。因此,本論文重點(diǎn)研究小膠質(zhì)細(xì)胞自噬對(duì)α-突觸核蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的調(diào)控作用與分子機(jī)制。研究方法:本論文以C57BL/6小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞及BV2細(xì)胞株為研究對(duì)象。以不同濃度（2.5、5和10mg/ml）人源重組α-synuclein蛋白單體作用于BV2或原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞中,在不同時(shí)間點(diǎn)（1h、3h、6h）通過(guò)免疫印跡測(cè)定LC3II、P62、Beclin1和mTOR等自噬相關(guān)蛋白及調(diào)控分子的表達(dá)變化,通過(guò)熒光顯微鏡計(jì)數(shù)LC3點(diǎn)的變化;收集培養(yǎng)48h后的過(guò)表達(dá)野生型α-synuclein蛋白的PC12細(xì)胞上清,將其轉(zhuǎn)移到BV2或原代小膠質(zhì)細(xì)胞中,以上述類似方法研究細(xì)胞自噬和自噬流量的變化,驗(yàn)證α-synuclein對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)自噬活性的影響。通過(guò)給予溶酶體抑制劑Baf A1或自噬激動(dòng)劑Rapamycin探究α-synuclein調(diào)控自噬的分子機(jī)制。以自噬相關(guān)基因Atg5 siRN... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

AMPK/mTOR通路介導(dǎo)α-synuclein對(duì)自噬的抑制作用圖A.免疫印跡測(cè)定α-synuclein條件培養(yǎng)基作用BV2細(xì)胞24h內(nèi)ATG5、ATG7及Beclin1表

圖 5：小膠質(zhì)細(xì)胞自噬調(diào)控神經(jīng)炎癥反應(yīng)圖 A-B. 免疫印跡測(cè)定 TLR4/NFκ B 通路蛋白及炎癥小體 NLRP3 蛋白表達(dá)，α -synuclein 激活 TLR4/NFκ B 通路及NLRP3的形成,n=4；圖C-E. Q-PCR 及ELISA 檢測(cè)炎癥因子表達(dá)水平，n=3-5；圖 F. 免疫印跡測(cè)定調(diào)控自噬 NLRP3 蛋白水平。n=3-5.One way ANOVA.*P<0.05，**P<0.01***P<0.001.6. 小膠質(zhì)細(xì)胞自噬調(diào)控細(xì)胞吞噬能力研究表明，α-synuclein 激活小膠質(zhì)細(xì)胞主要通過(guò)表面受體分子如 CD36、TLRs、MHCII 等，其一通過(guò)受體偶聯(lián)的信號(hào)通路激活小膠質(zhì)細(xì)胞、誘導(dǎo)炎癥相關(guān)分子的生成與釋放，其二是識(shí)別結(jié)合并介導(dǎo) α-synuclein 被吞噬。那么小膠質(zhì)細(xì)胞自噬是否影響其吞噬能力呢？本論文使用小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬熒光微球的數(shù)量來(lái)判定其吞噬能力，首先我們利用自噬誘導(dǎo)劑 Rapamycin 以及 siRNA 敲減 atg5，以增


本文編號(hào)：3386106