本文使用茴香霉素激活神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞內(nèi)c-jun氨基末端激酶（JNK）活性,實(shí)現(xiàn)激活后的JNK對神經(jīng)膠質(zhì)瘤抑瘤效果的探究,并找到受JNK調(diào)節(jié)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。試驗(yàn)首先利用在線分析網(wǎng)站預(yù)測出受JNK調(diào)節(jié)的相關(guān)腫瘤模型,通過使用茴香霉素（JNK激動(dòng)劑）實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞內(nèi)磷酸化JNK（P-JNK）水平的有效調(diào)節(jié),并通過蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）探究其發(fā)揮作用的最適條件;然后通過Cell Counting Kit-8（CCK-8）檢測、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞劃痕和流式細(xì)胞檢測等試驗(yàn),探究激活后的JNK對U251細(xì)胞的增殖、遷移能力以及細(xì)胞周期的影響;最后通過轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）技術(shù)分析找到受JNK調(diào)節(jié)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。試驗(yàn)結(jié)果表明:生物信息數(shù)據(jù)分析JNK與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展存在很強(qiáng)的相關(guān)性;1.0μg/mL茴香霉素作用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞1.0 h后,可有效激活細(xì)胞內(nèi)源性JNK活性,抑制細(xì)胞的增殖和遷移,并導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯;RNA-seq分析揭示了JNK可能通過調(diào)節(jié)P53活性實(shí)現(xiàn)抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤的生長。本文研究發(fā)現(xiàn),激活JNK后能夠?qū)ι窠?jīng)膠質(zhì)瘤產(chǎn)生抑瘤效果,為JNK可作為神經(jīng)膠... 

【文章來源】：激光生物學(xué)報(bào). 2020,29(05)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

在線網(wǎng)站分析JNK與神經(jīng)膠質(zhì)瘤之間的相關(guān)性

將U251細(xì)胞傳代至6 cm培養(yǎng)皿中，保證每皿細(xì)胞密度相同。待細(xì)胞完全貼壁后，在4皿細(xì)胞中分別加入不同質(zhì)量濃度（0.5、1.0、1.5、2.0μg/mL）的茴香霉素作為試驗(yàn)組，另一皿空白細(xì)胞中加入DMSO作為對照組。培養(yǎng)箱放置1 h后，收集蛋白，做Western blot檢測，試驗(yàn)結(jié)果表明茴香霉素質(zhì)量濃度為1.0μg/mL時(shí)激活JNK效果最好，具體結(jié)果如圖2a所示。同樣的方法傳代細(xì)胞，DMSO處理的為對照組，1μg/mL的茴香霉素分別處理不同時(shí)間（0.5、1.0、1.5 h）的細(xì)胞為試驗(yàn)組。將蛋白收集，做Western blot檢測，發(fā)現(xiàn)茴香霉素處理細(xì)胞的時(shí)間為1.0 h時(shí)JNK的激活效果最好，結(jié)果如圖2b所示。因此可以得出結(jié)論，質(zhì)量濃度為1μg/mL、處理時(shí)間為1.0 h的茴香霉素激活U251細(xì)胞中JNK的效果最好。2.3 激活JNK后能夠抑制U251的細(xì)胞增殖

將U251細(xì)胞鋪12孔板，待細(xì)胞密度達(dá)到100%時(shí)，進(jìn)行劃痕試驗(yàn)來分析細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。用DMSO處理的為對照組（圖4a1、4a2），用同體積1.0μg/m L茴香霉素處理的孔為試驗(yàn)組（圖4a3、4a4），分別在0 h（圖4a1、4a3）、24.0 h（圖4a2、4a4）時(shí)觀察劃痕寬度的變化并拍照。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)24.0 h后對照組細(xì)胞劃痕被分裂增殖的細(xì)胞愈合，寬度明顯變窄，而試驗(yàn)組細(xì)胞劃痕寬度未出現(xiàn)任何變化（圖4a）。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，細(xì)胞內(nèi)源JNK活性被激活后，U251細(xì)胞的遷移能力受到了顯著抑制。為了進(jìn)一步揭示細(xì)胞遷移能力的變化，采用qRT-PCR分析了E-鈣黏蛋白（E-cadherin,E-cad）的表達(dá)水平。E-cad是人黏附因子，其表達(dá)水平與細(xì)胞的遷移能力呈負(fù)相關(guān)[15]。試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)JNK被激活后，E-cad基因的表達(dá)量隨之上升（圖4b），且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Western blot檢測，E-cad蛋白的表達(dá)量也呈現(xiàn)相同的趨勢（圖4c）。上述試驗(yàn)說明在U251細(xì)胞中依靠藥物活化的JNK，抑制了U251細(xì)胞的遷移能力。2.5 激活JNK后能夠引起U251細(xì)胞周期的阻滯


本文編號(hào)：3369430