神經(jīng)退行性疾病是一種大腦和脊髓中神經(jīng)元受損的疾病,主要包括阿爾茨海默病、帕金森病、朊病毒病、亨廷頓病、肌萎縮側(cè)索硬化癥等,目前對于這類疾病還沒有有效的治療方法。不同的神經(jīng)退行性疾病有著相似的發(fā)病機(jī)制,即在大腦受損部位的胞內(nèi)或胞外出現(xiàn)淀粉樣蛋白質(zhì)積聚物,這類積聚物最終形成纖維狀結(jié)構(gòu)。在淀粉樣蛋白纖維化的過程中伴隨二級結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換,并且每種淀粉樣蛋白都有一個(gè)積聚核心序列,對病理學(xué)機(jī)制起著關(guān)鍵作用。積聚核心序列的結(jié)構(gòu)尚未得到解析,對其積聚和纖維化自組裝機(jī)制認(rèn)識甚少,嚴(yán)重制約著人類從分子水平上揭示神經(jīng)退行性疾病發(fā)病和發(fā)展的內(nèi)在原因。本研究工作首先首次用生物學(xué)方法成功表達(dá)純化出毫克量級的兩種與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的淀粉樣纖維蛋白TDP-43和α-Syn的積聚核心片段HC和NAC的非標(biāo)記和’5N標(biāo)記及13C-15N全標(biāo)記樣品。與傳統(tǒng)的化學(xué)合成方法相比,本方法不僅大大節(jié)約科研成本,而且順利實(shí)現(xiàn)了樣品的13C、15N標(biāo)記問題,為全長蛋白三維結(jié)構(gòu)的固體核磁共振解析鋪平了道路。本工作進(jìn)而采用傅里葉變換紅外光譜方法研究了與生物毒性密切相關(guān)的蛋白質(zhì)積聚過程,確定了HC和NAC在積聚過程中伴隨著二級結(jié)構(gòu)由α-hel... 

【文章來源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 神經(jīng)退行性疾病及研究現(xiàn)狀
        1.1.1 幾種神經(jīng)退行性疾病的介紹
            1.1.1.1 阿爾茲海默癥(AD)
            1.1.1.2 亨廷頓疾病(HD)
            1.1.1.3 帕金森病(PD)
            1.1.1.4 肌萎縮側(cè)索硬化癥(ALS)
            1.1.1.5 朊病毒(Prion)疾病
        1.1.2 神經(jīng)退行性疾病的病理學(xué)特征
            1.1.2.1 淀粉樣纖維蛋白的結(jié)構(gòu)特征及形成過程
            1.1.2.2 淀粉樣纖維蛋白的毒性及可能機(jī)制
            1.1.2.3 影響淀粉樣纖維蛋白形成的幾種因素
        1.1.3 神經(jīng)退行性疾病的治療研究現(xiàn)狀
    1.2 淀粉樣纖維蛋白結(jié)構(gòu)的研究方法
        1.2.1 淀粉樣纖維蛋白的形態(tài)學(xué)研究方法
            1.2.1.1 電子顯微鏡技術(shù)
            1.2.1.2 原子力顯微鏡技術(shù)
            1.2.1.3 X-射線晶體衍射法
        1.2.2 淀粉樣纖維蛋白的結(jié)構(gòu)學(xué)研究方法
            1.2.2.1 圓二色譜法(CD)
            1.2.2.2 熒光光譜法
            1.2.2.3 傅里葉變換紅外光譜法(FTIR)
            1.2.2.4 固體核磁共振法
    1.3 本工作的研究內(nèi)容及意義
第二章 固體核磁共振簡介
    2.1 核磁共振基本原理
    2.2 固體核磁共振基本原理及技術(shù)
    2.3 化學(xué)位移
第三章 與肌萎縮側(cè)索硬化癥相關(guān)的TDP-43蛋白積聚核心HC的表達(dá)純化及結(jié)構(gòu)初步表征
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料與儀器
        3.1.2 原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32M-HC的構(gòu)建
        3.1.3 HC在LB和M9培養(yǎng)基中的表達(dá)與純化
        3.1.4 蛋白質(zhì)濃度的測定
        3.1.5 HC積聚過程的紅外光譜表征
        3.1.6 HC結(jié)構(gòu)的固體核磁共振研究
    3.2 結(jié)果與討論
        3.2.1 HC的表達(dá)純化方案的探索與優(yōu)化
        3.2.2 HC的積聚過程的紅外光譜表征
        3.2.3 HC的固體核磁共振實(shí)驗(yàn)譜圖解析
    3.3 本章總結(jié)
第四章 與帕金森病相關(guān)的α-Synuclein蛋白的表達(dá)純化與結(jié)構(gòu)的初步表征
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料與儀器
        4.1.2 溶液與試劑的配制
        4.1.3 NAC的表達(dá)與純化
        4.1.4 蛋白質(zhì)濃度的測定
        4.1.5 NAC積聚過程的紅外光譜表征
    4.2 結(jié)果與討論
        4.2.1 NAC的表達(dá)與純化條件探索
        4.2.2 NAC的蛋白濃度測定結(jié)果
        4.2.3 NAC積聚過程的紅外光譜表征
    4.3 本章總結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3364320