本研究采用Western Blot分析、熒光蛋白標記、臺盼藍染色、RNA干擾、DNA剪切、DAPI和TUNEL染色等細胞和分子生物學技術(shù)及方法,以PC12細胞、SH-SY5Y細胞、小鼠原代神經(jīng)元為實驗對象,通過建立的鎘染毒細胞模型和細胞PD模型,較為系統(tǒng)地解析了 NOX2-ROS介導(dǎo)AMPK/Akt-mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在神經(jīng)細胞凋亡中的作用及其調(diào)控分子機理。結(jié)果如下:1雷公藤紅素調(diào)控AMPK/mTOR信號涉及抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡以PC12細胞、SH-SY5Y細胞或原代神經(jīng)元、或用shRNAmTOR和shRNA GFP感染的PC12細胞為實驗對象,用雷公藤紅素（1 μM）預(yù)處理1h,接著暴露10和20 μM鎘4 h或24 h。臺盼藍染色分析細胞存活、觀察細胞形態(tài)、DAPI和TUNEL染色評估細胞凋亡表現(xiàn);熒光標記分析Caspase-3/7活性;Western Blot分析 ACC、AMPK、mTOR、S6K1、4E-BP1、Cleaved-caspase-3 等蛋白表達。結(jié)果顯示,雷公藤紅素顯著抑制鎘誘導(dǎo)細胞活力下降和凋亡升高,以及Caspase-3/7活性和Cleaved-caspase... 

【文章來源】：南京師范大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：186 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１細胞凋亡示意圖??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ??

或Ｃａｓｐａｓｅ－９，從而引起細胞凋亡。同時，半胱天冬酶也可以響應(yīng)于線粒體的變??化和細胞色素ｃ釋放活性，激活的ＤＮＡ酶切割ＤＮＡ為碎片樣［２＼從而導(dǎo)致細??胞凋亡，如圖１－２，即其形態(tài)學和生化特征Ｍ。??Ｄｅａｔｈ?ｓｉｇｎａｌｓ?？?Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ??？?Ｇｌｕｔａｍａｉｆ；??？?Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ－ｆａｃｌｏｒｓ?Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ????＾?？?Ｇｅｎｅｔｉｃ?ｍｕｔａｔｉｏｎ????ｙ’?１?ｒ?Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ?ｃ?＼?Ｂｌｅｂｓ??Ｏｘｙｇｅｎ?ｒａｄｉｃａｔｅ／Ｃａ２＋?ｊ?Ａｐａｆ－１?、、？、?＼??，／?Ｘ?．／?ｆＣａｓｐａｓｅ－９?＼?ＸＸ??＃?ｆ?＼?／?Ｊ?ｗ?Ｄｅａｔｈ?ｆ?Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ?＼??／?ｐａｒ－４?／?ｆ?＾＾ｕｂｓ｛ｒａｔｅｓ＼?／?Ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ?＼??Ｉ?Ｂａｘ．?Ｂａｄ?＾?＼?ｉ?Ｃａｓｐａｓｅ－３?＾?＾?？??＼?Ｋ?Ｎｕｃｌｅｕｓ?）／?＼?；／?Ｃｘ??Ｖ?＼?Ｍｉｔ？Ａｄｎｃｉｒｉ〇ｎ?）?＼?ｊｆ?＼?＼ｐｘｙｆａｄｉｃｆｅｌｌ／Ｇａ２７?＼?ｊｌ?＼?＾＇＜３＾?＾??＾：：：ｙ?Ｖ；＞??Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ?ｐｈａｓｅ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?ｐｈａｓｅ?Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ?ｐｈａｓｅ??圖１－２細胞凋亡形態(tài)學特點和生化特征［７］??Ｆｉｇ．?１－２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ａｎｄ?ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｆｅａｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［７］??１．３細胞凋亡的基因表達??參與細胞凋亡調(diào)控的基因有很多

＾ｇｇｇｍ??Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ??圖２－１自由基對蛋白質(zhì)、ＤＮＡ和脂類等生物分子的影響⑷??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｆｒｅｅ?ｒａｄｉｃａｌｓ?ｏｎ?ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ?ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ??ｐｒｏｔｅｉｎｓ，?ＤＮＡ，?ｌｉｐｉｄｓ，?ｅｔｃ？卩Ｉ??２?ＮＡＤＰＨ氧化酶（ＮＯＸｓ）家族??ＲＯＳ對神經(jīng)元的更直接的作用是通過幾種酶的激活，如ＮＡＤＰＨ氧化酶??（ＮＡＤＰＨ?ｏｘｉｄａｓｅｓ，ＮＯＸｓ），誘生型—氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ?ｎｉｔｒｉｃ?ｏｘｉｄｅ?ｓｙｎｔｈａｓｅ，??ｉＮＯＳ），脂氧合酶和環(huán)氧合酶（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，?ＣＯＸ）等的表達［２３］。其中越來??越多的證據(jù)表明，ＮＯＸｓ作為一個把電子傳送到質(zhì)膜并產(chǎn)生超氧化物的酶復(fù)合??物，對細胞內(nèi)ＲＯＳ的產(chǎn)生起著重要的作用［２６］。而神經(jīng)系統(tǒng)細胞含有ＮＯＸｓ復(fù)合??體，當其組裝并且被激活時，隨即引發(fā)大量的自由基導(dǎo)致組織損傷［２７］。??２．１?ＮＯＸｓ家族的種類??二十世紀八十年代


本文編號：3345784