發(fā)布時間：2017-04-28 14:03

  本文關(guān)鍵詞：紫杉醇對實驗性自身免疫性腦脊髓炎防治作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察紫杉醇(PTX)對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的防治作用并探討其作用機制。方法:將50只Wistar雌性大鼠隨機分為5組:正常對照組、EAE對照組及PTX小劑量、中劑量、大劑量組,每組10只。用新鮮豚鼠脊髓勻漿(GPSCH)與含卡介苗(BCG)的完全福氏佐劑(CFA)作為免疫抗原注入EAE對照組及PTX各劑量組大鼠雙足側(cè)足墊(2ml/kg)進(jìn)行EAE造模,正常對照組給予相同劑量的完全福氏佐劑。自造模當(dāng)日起連續(xù)10天,PTX小、中、大劑量組分別給予PTX1mg、2mg、4mg/(kg.d)腹腔注射進(jìn)行干預(yù)。觀測各組大鼠臨床發(fā)病情況、潛伏期、進(jìn)展期及發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分。于EAE大鼠發(fā)病高峰期(大鼠神經(jīng)功能障礙評分連續(xù)三天無增加或大鼠處于瀕死狀態(tài)、對外界刺激無反應(yīng)或死亡)終止實驗,已經(jīng)注入免疫抗原進(jìn)行EAE造模處理而未發(fā)病大鼠及正常對照組大鼠分別均于觀察1個月后處死。留取大鼠腦脊髓組織、眶靜脈血和脾臟組織。部分大鼠腦脊髓組織作蘇木素-伊紅(HE)染色后行光鏡觀察并根據(jù)Okuda等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分,部分經(jīng)相應(yīng)處理后采用流式細(xì)胞儀測定腦組織CD28、CTLA-4含量(又稱CD152);通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分泌IFN-γ和IL-4水平;并采用放射免疫法測定血清TGF-β含量;用流式細(xì)胞儀的方法檢測大鼠脾組織Thl細(xì)胞、Th2細(xì)胞的比例;采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定脾組織上清液B淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)含量。使用spss17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:(1)臨床情況:①正常對照組大鼠未發(fā)病;EAE對照組大鼠全部發(fā)病;PTX小、中、大劑量組分別有7、5、4只大鼠發(fā)病。發(fā)病時大鼠表現(xiàn)為不同程度尾巴張力降低、共濟失調(diào)、四肢癱瘓、瀕死狀態(tài)甚至死亡,但PTX各劑量組大鼠的臨床癥狀較EAE對照組輕,且劑量越大,癥狀越輕。②與EAE對照組相比,PTX各劑量組發(fā)病潛伏期均延長(P0.05),劑量越大潛伏期延長越明顯,大與小劑量組、中與小劑量組潛伏期差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但大與中劑量組潛伏期差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。③與EAE對照組相比,PTX各劑量組疾病進(jìn)展期均縮短,且隨PTX劑量增加而縮短越明顯,各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。④與EAE對照組相比,PTX各劑量組神經(jīng)功能障礙評分均降低,且隨PTX劑量增加而降低越明顯,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)HE染色病理學(xué)觀察:正常對照組大鼠腦組織內(nèi)未見炎性細(xì)胞浸潤。EAE對照組及PTX各劑量組腦組織小血管周圍均可見不同程度炎性細(xì)胞浸潤,典型者大量淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞聚集于血管周圍呈袖套樣改變。按Okuda等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分,與EAE對照組相比,PTX各劑量組評分均有下降(P0.05),且隨PTX劑量增加而腦組織病理學(xué)評分依次降低,各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)EAE對照組及PTX各劑量組腦組織CD28、CTLA-4含量變化:①EAE對照組及PTX各劑量組腦組織CD28含量較正常對照組高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);PTX各劑量組腦組織CD28含量皆較EAE對照組降低,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);腦組織CD28含量隨PTX劑量增加而明顯降低,各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。②EAE對照組及PTX各劑量組腦組織CTLA-4含量較正常對照組低,其中EAE對照組、PTX中、小劑量組與正常對照組差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);PTX各劑量組腦組織CTLA-4含量均較EAE對照組升高,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);腦組織CTLA-4含量隨PTX劑量增加而明顯增加,PTX大、小劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),PTX大與中劑量組、中與小劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(4)EAE對照組及PTX各劑量組PBMC分泌IFN-γ和IL-4水平及其比值變化:①EAE對照組及PTX各劑量組大鼠發(fā)病高峰期PBMC分泌INF-γ能力較正常對照組增強(P0.01),PTX大劑量組分泌INF-γ能力較EAE對照組明顯降低(P0.01),但PTX各劑量組間分泌INF-γ能力差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。②EAE對照組及PTX各劑量組大鼠發(fā)病高峰期PBMC分泌IL-4能力較正常對照組降低(P0.01),PTX各劑量組PBMC分泌IL-4能力較EAE對照組增強(P0.01),且隨PTX劑量的增加而分泌IL-4能力逐漸增強,其中大劑量組分泌IL-4的能力與中、小劑量組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01或P0.05),但中、小劑量間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。③EAE對照組及PTX各劑量組大鼠發(fā)病高峰期INF-γ/IL-4比值較正常對照組升高(P0.01),PTX各劑量組INF-γ/IL-4比值較EAE對照組降低(P0.01),且隨PTX劑量增加,其比值逐漸減小,PTX各劑量組間INF-γ/IL-4比值差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。(5)EAE對照組及PTX各劑量組血清TGF-β含量變化:與正常對照組相比,EAE對照組及PTX各劑量組血清TGF-β含量均減少(P0.05)。與EAE對照組比較,PTX各劑量組TGF-β含量均增加(P0.05),且隨PTX劑量的增加,血清TGF-β含量逐漸增大,各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(6)脾組織Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞含量、Th1/Th2比值及脾組織上清液BAFF含量變化:①與正常對照組相比,EAE對照組及PTX各劑量組脾組織Th1細(xì)胞含量增加、Th2細(xì)胞含量降低,Th1/Th2比值增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01或P0.05);與EAE對照組比較,PTX各劑量組脾組織Th1細(xì)胞含量降低、Th2細(xì)胞含量增加,Th1/Th2比值降低,其中大劑量組脾組織Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞含量與EAE對照組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01),PTX各劑量組Th1/Th2比值較EAE對照組降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);隨PTX劑量的增加,脾組織Th1細(xì)胞含量依次減少、Th2細(xì)胞含量依次增加、Th1/Th2比值依次減少,其中大與小劑量組Th1細(xì)胞含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),大、中劑量組Th2細(xì)胞含量皆與小劑量組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),PTX各劑量組脾組織Th1/Th2比值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01或P0.05)。②與正常對照組相比,EAE對照組及PTX各劑量組脾組織上清液BAFF含量均增加(P0.01);與EAE對照組比較,PTX各劑量組脾組織上清液BAFF含量均減少(P0.01或P0.05);隨PTX劑量的增加,BAFF含量依次減少,各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。(7)相關(guān)性分析:①EAE對照組及PTX各劑量組發(fā)病潛伏期與大鼠腦組織CTLA-4含量、血清TGF-β含量、脾組織Th2細(xì)胞含量呈正相關(guān)(P0.01),與腦組織CD28、外周血PBMC分泌IFN-γ/IL-4比值和脾組織Th1細(xì)胞、BAFF含量、Th1/Th2比值呈負(fù)相關(guān)(P0.01或P0.05)。②EAE對照組及PTX各劑量組發(fā)病進(jìn)展期與大鼠腦組織CD28、外周血PBMC分泌IFN-γ/IL-4比值和脾組織Th1細(xì)胞、BAFF含量、Th1/Th2比值呈正相關(guān)(P0.01或P0.05),與腦組織CTLA-4含量、血清TGF-β含量、脾組織Th2細(xì)胞含量呈負(fù)相關(guān)(P0.01)。③EAE對照組及PTX各劑量組發(fā)病高峰期大鼠神經(jīng)功能障礙評分與大鼠腦組織CD28、外周血PBMC分泌IFN-γ/IL-4比值和脾組織Th1細(xì)胞、BAFF含量、Th1/Th2比值呈正相關(guān)(P0.01或P0.05),與腦組織CTLA-4含量、血清TGF-β含量、脾組織Th2細(xì)胞含量呈負(fù)相關(guān)(P0.01)。結(jié)論:1.EAE大鼠Th1/Th2比值、IFN-γ/IL-4比值升高、CD28含量增加、CTLA-4含量降低、BAFF水平增加,其變化與EAE大鼠臨床病情、腦脊髓組織病理變化密切相關(guān),提示Th1/Th2平衡漂移及其代表因子IFN-γ/IL-4比值異常、CD28/CTLA-4含量異常、BAFF水平異常在EAE發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。2.PTX可改善EAE大鼠的臨床癥狀,延長發(fā)病潛伏期,縮短疾病進(jìn)展期,降低疾病高峰期神經(jīng)功能障礙評分,改善EAE大鼠腦組織病理學(xué)改變,且PTX劑量越大,影響越明顯,提示PTX對EAE大鼠發(fā)病具有防治作用,且呈劑量依賴關(guān)系。3.PTX對EAE大鼠發(fā)病防治作用的機制可能通過糾正Th1/Th2漂移、降低IFN-γ/IL-4比值、減少CD28含量、增加CTLA-4含量、抑制BAFF產(chǎn)生而發(fā)揮的。
【關(guān)鍵詞】：紫杉醇 實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎 T淋巴細(xì)胞 細(xì)胞因子 B淋巴細(xì)胞刺激因子
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R744.5
【目錄】：

• 中文摘要3-8
• 英文摘要8-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-26
• 結(jié)果26-43
• 討論43-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-68
• 英漢縮略詞對照表68-70
• 致謝70-71
• 綜述 抗癌藥物對多發(fā)性硬化治療的研究進(jìn)展71-86
• 參考文獻(xiàn)80-86

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本文編號：332929