發(fā)布時(shí)間：2021-08-07 00:06

　　目的觀察大鼠腦出血（intracerebral hemorrhage,ICH）模型腦組織自噬相關(guān)蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3）、Beclin1和核因子-κB（nuclear factor-κappa B,NF-κB）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）的變化,以探討自噬對(duì)腦出血大鼠腦組織神經(jīng)元細(xì)胞繼發(fā)性炎癥損傷的影響及3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3MA）干預(yù)作用,進(jìn)而探討抑制自噬對(duì)腦出血大鼠的保護(hù)作用及可能機(jī)制。方法1模型制備及分組:實(shí)驗(yàn)采用自體新鮮不抗凝血液注入大鼠右側(cè)大腦基底節(jié)區(qū)建立ICH模型。成年雄性SD大鼠180只,隨機(jī)分為如下三組:假手術(shù)組（Sham組）;腦出血模型組（ICH模型組）:采用自體新鮮不抗凝血液注入大鼠右側(cè)基底節(jié)區(qū)制作ICH模型;腦出血模型+抑制劑干預(yù)組（ICH+3MA組）:于腦出血造模前15min給予3MA腹腔注射5mg/kg,隨后每日注射一次。每組按不同時(shí)間點(diǎn)（0.5d、1d、2d、3d、5d）又分為五個(gè)... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠腦出血模型制備過(guò)程

-13-1.2結(jié)果1.2.1腦出血模型及神經(jīng)行為學(xué)檢查結(jié)果各組大鼠手術(shù)前神經(jīng)行為學(xué)均無(wú)異常。腦出血大鼠模型制作過(guò)程中因麻醉、術(shù)后感染等原因死亡11只，死亡大鼠作為缺失值剔除，并在后續(xù)試驗(yàn)中補(bǔ)充。手術(shù)后，根據(jù)Longa評(píng)分法[20]，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)定。Sham組大鼠在完全清醒后，無(wú)明顯神經(jīng)功能障礙，肢體活動(dòng)自如，刺激肢體痛覺(jué)反應(yīng)靈敏，神經(jīng)學(xué)檢查評(píng)分為0分。ICH模型組、ICH+3MA組大鼠完全清醒后，出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙，精神狀態(tài)差，毛發(fā)無(wú)光澤，活動(dòng)時(shí)出現(xiàn)轉(zhuǎn)圈，評(píng)分升高，在術(shù)后3d時(shí)最為嚴(yán)重，出現(xiàn)傾倒或肢體癱瘓；隨時(shí)間推移神經(jīng)功能障礙逐漸減輕，Longa評(píng)分降低。與Sham組相比，出血各組大鼠相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與ICH模型組相比，ICH+3MA干預(yù)組在5d前各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分均低于ICH模型組（P<0.05）。圖2大鼠腦出血后行為學(xué)表現(xiàn)表1不同時(shí)間點(diǎn)大鼠神學(xué)檢查評(píng)分比較（±s，n=10）組別0.5d1d2d3d5dSham組00000ICH組1.71±0.54*1.83±0.48*2.26±0.45*2.67±0.34*1.81±0.53*ICH+3MA組1.47±0.56#1.58±0.67#1.96±0.51#2.16±0.47#1.76±0.49注：*與Sham組比，P<0.05；#與ICH模型組比，P<0.051.2.2大鼠腦出血后腦組織形態(tài)學(xué)變化觀察HE染色各組大鼠腦組織切片，Sham組腦組織基底節(jié)區(qū)切片未見(jiàn)明顯病理學(xué)變化，腦組織內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)清晰，排列整齊而緊密，細(xì)胞胞體大，胞質(zhì)均勻淡染，核仁明顯，細(xì)胞核呈淡藍(lán)色染。肉眼觀察，ICH模型腦組織有出血灶形成，

-14-可見(jiàn)明顯占位效應(yīng)，出血灶周圍可見(jiàn)明顯血腫；鏡下觀察，可見(jiàn)血腫周圍腦組織有大量紅細(xì)胞，細(xì)胞排列疏松、不規(guī)則，細(xì)胞外間隙變大，細(xì)胞核失去正常形態(tài)，神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死，此現(xiàn)象以3d時(shí)最為顯著，細(xì)胞結(jié)構(gòu)多不完整，周圍可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，至5d時(shí)緩解。ICH+3MA組神經(jīng)細(xì)胞變化較ICH模型組減輕（圖3、圖4）。圖3大鼠腦出血血腫位置A—Sham組（×100）；B—ICH模型組（×100）；C—ICH+3MA組（×100）；D—Sham組（×400）；E—ICH模型組（×400）；F—ICH+3MA組（×400）。圖4各組大鼠腦組織染色結(jié)果(HE染色)1.2.3尼氏染色觀察腦組織切片尼氏染色切片置于顯微鏡下觀察，Sham組神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)完整，尼氏小體大且數(shù)量多。與Sham組相比，ICH模型組腦組織神經(jīng)細(xì)胞尼氏小體0.5d開(kāi)始減少，腦組織出現(xiàn)水腫，隨時(shí)間推移，尼氏小體逐漸減少，至3d神經(jīng)細(xì)胞及尼氏小體數(shù)量顯著減少，神經(jīng)細(xì)胞胞體變小，細(xì)胞核碎裂，細(xì)胞間隙大，細(xì)胞間質(zhì)水腫，隨機(jī)


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