本文關(guān)鍵詞：Let-7d慢病毒載體對體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的micro RNAs是一類高度保守的、非編碼內(nèi)源性小RNA分子,對機(jī)體正常的生長發(fā)育及疾病的發(fā)生發(fā)展起著重要的作用。Let-7家族成員對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的分化起著重要的作用,了解微小RNA let-7d對MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響可以促進(jìn)顱內(nèi)干細(xì)胞移植的發(fā)展。本文通過體外構(gòu)建let-7d慢病毒載體并轉(zhuǎn)染MSCs來探討let-7d在MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化過程中的作用。方法1構(gòu)建大鼠慢病毒載體,分別為轉(zhuǎn)染空白慢病毒、轉(zhuǎn)染let-7d目的基因,轉(zhuǎn)染抑制let-7d表達(dá)的目的基因,并用這些慢病毒載體轉(zhuǎn)染大鼠MSCs;根據(jù)轉(zhuǎn)染的慢病毒載體的不同,實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)組:即轉(zhuǎn)染上調(diào)組(轉(zhuǎn)染let-7d-LV)、轉(zhuǎn)染下調(diào)組(轉(zhuǎn)染let-7d-inhibition-LV)、陰性對照組(轉(zhuǎn)染空白慢病毒)、未轉(zhuǎn)染組。2 MTT法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的存活率。3采用法舒地爾誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染后的各組MSCs促使其分化為神經(jīng)細(xì)胞,4以免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測分化后細(xì)胞表面NSE、MAP-2的表達(dá)變化,以確定MSCs已分化為神經(jīng)細(xì)胞;5應(yīng)用RT-PCR、Western bolt法檢測分化后神經(jīng)細(xì)胞MAP-2 m RNA的表達(dá)量,以確定MSCs分化為神經(jīng)細(xì)胞的效率;結(jié)果1在倒置熒光顯微鏡下觀察到轉(zhuǎn)染的MSCs有熒光顯示,提示let-7d慢病毒載體轉(zhuǎn)染成功。各組之間細(xì)胞的熒光強(qiáng)度無明顯差異,提示不同組別之間細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率無明顯差異。2 MTT法檢測細(xì)胞存活率,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染上調(diào)組、轉(zhuǎn)染下調(diào)組及陰性轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞存活率之間無顯著差異(P0.05),但此三組細(xì)胞存活率均低于未轉(zhuǎn)染組。3在轉(zhuǎn)染后的各組細(xì)胞之間加入法舒地爾,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,免疫細(xì)胞化學(xué)法發(fā)現(xiàn)高表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)志物NSE、MAP-2,表明法舒地爾可以誘導(dǎo)MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化。4免疫細(xì)胞化學(xué)法發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染上調(diào)組細(xì)胞的NSE、MAP-2的熒光強(qiáng)度高于陰性對照組和轉(zhuǎn)染下調(diào)組(P0.05),而轉(zhuǎn)染下調(diào)組細(xì)胞的NSE、MAP-2的熒光強(qiáng)度低于陰性對照組和轉(zhuǎn)染下調(diào)組(P0.05)。5 RT-PCR法檢測MAP-2 m RNA表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染上調(diào)組細(xì)胞的MAP-2表達(dá)量高于陰性對照組和轉(zhuǎn)染下調(diào)組(P0.05),而轉(zhuǎn)染下調(diào)組細(xì)胞的MAP-2表達(dá)量低于陰性對照組和轉(zhuǎn)染下調(diào)組(P0.05)。結(jié)論1 let-7d慢病毒載體可以在體外轉(zhuǎn)染大鼠MSCs,并且可以用于實(shí)驗(yàn)研究。2 let-7d可以促進(jìn)MSCs向神經(jīng)細(xì)胞的分化,通過控制let-7d的表達(dá)可以影響MSCs向神經(jīng)細(xì)胞的分化效率。
【關(guān)鍵詞】：let-7d 慢病毒載體 MSCs 神經(jīng)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文縮略詞10-11
• 1 引言11-13
• 2 材料與方法13-18
• 3 結(jié)果18-20
• 4 討論20-24
• 5 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-30
• 附表與圖30-36
• 綜述 Let-7d的功能及其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用36-52
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 個(gè)人簡歷52-53
• 致謝53

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王翠琴;張廣宇;彭越;彭濤;賈延R

本文編號：332203