發(fā)布時(shí)間：2021-08-03 10:48

　　目的:探討miR-34b/miR-23a靶向Keap1/ULK1調(diào)控大鼠腦缺血再灌注氧化應(yīng)激反應(yīng)的分子機(jī)制。方法:（1）應(yīng)用QPCR技術(shù)檢測(cè)I/R大鼠腦梗死核心組織中miR-34b/miR-23a的表達(dá)水平;通過(guò)慢病毒技術(shù)在MCAO大鼠腦組織中過(guò)表達(dá)miR-34b/miR-23a,再灌注后Berdron評(píng)分與TTC染色檢測(cè)大鼠的神經(jīng)損傷和腦梗死體積,化學(xué)比色法測(cè)定總SOD、NO和MnSOD含量,ELISA檢測(cè)3-NT含量;（2）借助QPCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)I/R大鼠腦梗死核心組織中Keap1/ULK1的表達(dá)情況,檢測(cè)miR-34b/miR-23a對(duì)Keap1/ULK1的表達(dá)調(diào)控,并用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-34b/miR-23a與Keap1-3′-UTR/ULK1-3′-UTR的靶向結(jié)合位點(diǎn);（3）采用H₂O₂誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷,分別上下調(diào)Keap1,過(guò)表達(dá)miR-34b和Keap1,過(guò)表達(dá)miR-23a和ULK1,再用化學(xué)比色法測(cè)定總SOD、NO與MnSOD的含量,ELISA檢測(cè)3-NT的含量。結(jié)果:（1）相較于假手術(shù)組,... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：130 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

腦缺血再灌注對(duì)腦組織中miR-34b-3p的表達(dá)影響

0.934 0.996 0.198 0.667 1.5241.082 0.938 0.260 0.732 1.458圖1-2 腦缺血再灌注對(duì)腦組織中miR-23a-5p的表達(dá)影響control：對(duì)照組；sham：假手術(shù)組；1：再灌注1h；4：再灌注4h；24：再灌注24h。Fig.1-2 Relative expression of miR-23a-5p in I/Rcontrol，sham，1：I/R 1h，4：I/R 4h，24：I/R 24h.2.2 miR-34b和miR-23a的慢病毒過(guò)表達(dá)驗(yàn)證為了研究miR-34b-3p和miR-23a-5p在I/R損傷中的詳細(xì)功能，我們通過(guò)在腦室內(nèi)分別注射miR-34b-3p和miR-23a-5p過(guò)表達(dá)慢病毒來(lái)實(shí)現(xiàn)大鼠組織中的miR-34b-3p和miR-23a-5p的過(guò)表達(dá)，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行效果驗(yàn)證。如圖1-3為注射miR-34b-3p過(guò)表達(dá)慢病毒后大鼠組織中miR-34b-3p表達(dá)效率檢測(cè)，結(jié)果顯示注射miR-34b-3p過(guò)表達(dá)慢病毒后大鼠組織中miR-34b-3p的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。如圖1-4為注射miR-23a-5p過(guò)表達(dá)慢病毒后大鼠組織中miR-23a-5p表達(dá)效率檢測(cè)

新疆醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文36圖1-3 大鼠腦組織中miR-34b-3p過(guò)表達(dá)慢病毒效率驗(yàn)證結(jié)果Fig.1-3 Validation of the efficiency of miR-34b-3p over-expression lentivirus in rat brain表1-17 大鼠腦組織中miR-23a-3p過(guò)表達(dá)慢病毒效率Tab 1-17 Validation of the efficiency of miR-23a-3p over-expression lentivirus in rat brainpLVX-NC pLVX-miR-23a1.000 2.2011.050 2.3871.064 2.081圖1-4 大鼠腦組織中miR-23a-5p過(guò)表達(dá)慢病毒效率驗(yàn)證結(jié)果Fig.1-4 Validation of the efficiency of miR-23a-5p over-expression lentivirus in rat brain2.3 miR-34b/miR-23a過(guò)表達(dá)對(duì)I/R神經(jīng)功能評(píng)分的影響過(guò)表達(dá)慢病毒注射后3天，建立MCAO大鼠模型。MCAO大鼠建模蘇醒后的大鼠可能會(huì)出現(xiàn)一些神經(jīng)功能損傷的癥狀。有些大鼠會(huì)出現(xiàn)精神差，嗜睡，反應(yīng)慢，進(jìn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3319486