發(fā)布時(shí)間：2021-07-30 22:15

　　目的觀察熒光大鼠嗅球來源的嗅鞘細(xì)胞經(jīng)顱移植到放射冠后對mSOD1G93A轉(zhuǎn)基因ALS大鼠的發(fā)病時(shí)間、生存率、行為學(xué)等方面的影響，探討嗅鞘細(xì)胞經(jīng)顱移植到放射冠對mSOD1G93A轉(zhuǎn)基因ALS大鼠的治療作用及相關(guān)機(jī)制，為臨床ALS治療提供相關(guān)的實(shí)驗(yàn)學(xué)證據(jù)。方法1mSOD1G93A轉(zhuǎn)基因大鼠的篩選鑒定出生21天的仔鼠剪鼠尾適量，DNA提取后PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)下觀察。2嗅鞘細(xì)胞培養(yǎng)新生1周的SD大鼠，熒光顯微鏡下觀察，篩選出熒光表現(xiàn)陽性的大鼠備用，先用碘伏消毒其全身，尤其是頭頸部，再用酒精噴灑脫碘后拿到超凈工作臺內(nèi)，用消毒剪沿頸部剪下，換剪刀后沿頭頂正中線剪開皮膚和顱骨，取出雙側(cè)嗅球，放于冰塊上的DF-12內(nèi)，清洗三遍，解剖鏡下剝膜，頭部難剝離部分可適當(dāng)保留，用眼科剪剪成1立方毫米大小的組織塊，將剪碎的組織塊移入15ml離心管，用彎頭吸管來回輕輕吹打，制成細(xì)胞懸液，胰蛋白酶消化后收集細(xì)胞，以13%的血清培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液平均鋪入經(jīng)多聚賴氨酸包板后的細(xì)胞培養(yǎng)板中，在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3嗅鞘細(xì)胞鑒定包括形態(tài)學(xué)鑒定和免疫熒光染色鑒定，形態(tài)學(xué)鑒定可在倒置顯微鏡下觀察... 

【文章來源】：泰山醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)步驟簡圖：大鼠出生后90天進(jìn)行嗅鞘細(xì)胞放射冠移植，發(fā)

圖 2 mSOD1G93A 基因表達(dá)的 PCR 鑒定結(jié)果M為Marker ；1、5、6、8 為mSOD1G93A轉(zhuǎn)基因陽性鼠；2、3、4、7、9 為mSOD1G93A轉(zhuǎn)基因陰性鼠。Fig.2.Identification of mutant SOD1G93A transgenic through PCM is the Marker; 1、5、6、8 are positive expression mo2、3、4、7、9 are negative expression mouse.細(xì)胞的培養(yǎng)材 天的 SD 大鼠，熒光顯微鏡下進(jìn)行篩選，選擇表達(dá)用鑷子夾取浸泡于碘伏內(nèi)的棉球擦拭鼠頭及鼠身和鼠頸部，徹底消毒，再用酒精棉球擦拭或用裝

結(jié) 果1 嗅鞘細(xì)胞移植前的鑒定及移植后的存活和遷移細(xì)胞培養(yǎng)后定期在顯微鏡下進(jìn)行觀察和鑒定，主要看細(xì)胞的形態(tài)和生長狀態(tài)，培養(yǎng)三天后觀察可見細(xì)胞以梭形和多突起細(xì)胞為主,細(xì)胞立體感強(qiáng)、透亮、雜質(zhì)細(xì)胞較少（圖 3，A）。在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 7 天后進(jìn)行GFP綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞的免疫組化染色（圖 3，B）及其所表達(dá)的P75 蛋白的情況（圖 3，C）。高倍共聚焦顯微鏡下觀察P75 陽性細(xì)胞（圖 3 D和E，F(xiàn)）的比例。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肌電圖評價(jià)肌萎縮側(cè)索硬化389例嗅鞘細(xì)胞腦內(nèi)移植的效果[J]. 陳琳,黃紅云,江昭,王援朝,王慶苗,郗海濤,包建玲,王洪美.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(43)
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本文編號：3312222