目的探討miR-1247-3p對腦缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury,IS/R）中腦神經(jīng)細胞凋亡的影響,并闡明miR-1247-3p調(diào)控神經(jīng)細胞凋亡的上下游分子機制。方法建立小鼠大腦中動脈阻塞模型（cerebral middle artery occlusion,MCAO）缺血1 h/再灌注0 h、6 h、12 h、24 h及N2a細胞氧糖剝奪3 h/復(fù)氧復(fù)糖（oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）0 h、6 h、12 h、24 h損傷模型,觀察miR-1247-3p表達的變化;在此基礎(chǔ)上,側(cè)腦室注射LV-miR-1247-3p慢病毒7天以及轉(zhuǎn)染25 nM miR-1247-3p mimic 48 h,觀察過表達miR-1247-3p后,對神經(jīng)細胞凋亡的影響。并用20?M Caspase-2抑制劑Z-VDVAD-FMK處理N2a細胞,觀察其機制是否與調(diào)控caspase-2表達有關(guān);在此基礎(chǔ)上,轉(zhuǎn)染MRTF-A過表達質(zhì)粒至N2a細胞,觀察過表達MRTF-A對miR-1247-3p調(diào)控神經(jīng)細胞凋亡的... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-1247-3p在腦缺血再灌注損傷體內(nèi)模型小鼠腦組織中的表達

+P < 0.05,++P < 0.01 vs. LV-NEG + IS 1 h/R 24 h.3.3 過表達 miR-1247-3p 可以減輕腦缺血再灌注損傷中的神經(jīng)元凋亡為了驗證過表達 miR-1247-3p 對腦缺血再灌注誘導(dǎo)的腦神經(jīng)細胞凋亡的影響，我們通過 TUNEL 染色和 cleaved caspase-3 蛋白水平來判斷細胞凋亡情況。結(jié)果表明，與 sham 組相比，IS 1 h/R 24 h 組的小鼠腦組織皮層 TUNEL 陽性率顯著升高（41.4 3.8% ，P < 0.001，F(xiàn)ig. 3A, B），cleaved caspase-3 蛋白水平顯著上調(diào)（1.9 0.2 ，P < 0.001，F(xiàn)ig. 3C）。過表達 miR-1247-3p 后，與 LV-NEG +IS 1 h/R 24 h 組相比，LV-miR-1247-3p + IS 1 h/R 24 h 組小鼠皮層 TUNEL 陽性細胞減少（19.1 2.4 %，P < 0.001，F(xiàn)ig. 3A, B），cleaved caspase-3 水平下降（1.1 0.1 ，P < 0.05，F(xiàn)ig. 3C），且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。以上結(jié)果表明，過表達miR-1247-3p 能減輕腦缺血再灌注損傷的細胞凋亡。

圖 4 miR-1247-3p 在體外 OGD/R 模型中的表達以及 N2a 細胞凋亡。在 OGD/R模型之前 48 h，N2a 細胞轉(zhuǎn)染 miR-1247-3p mimic 和 NEG mimic。（A）miR-1247-3p 在不同再灌注時間點的表達。（B）RT-PCR 檢測 N2a 細胞轉(zhuǎn)染miR-1247-3p mimic 之后 miR-1247-3p 的表達。（C）TUNEL 染色代表性圖片檢測細胞凋亡發(fā)生情況。（D）細胞凋亡發(fā)生率百分比。（E）western blotting 檢測cleaved caspase-3 蛋白水平。所有的值均采用平均值 SEM（n = 4）。*P < 0.05, **P< 0.01 和***P < 0.001 與 ctrl 組相比；**P < 0.01 和***P < 0.001 與 NEG-mimic組相比；++P < 0.01 和+++P < 0.001 與 NEG mimic+OGD 3 h/R 24 h 組相比。Fig. 4 miR-1247-3p expression in vitro and N2a apoptosis. N2a cells weretransfected with a miR-1247-3p mimic or NEG mimic prior to OGD/R treatment. (A)Expression of miR-1247-3p at different reperfusion times. (B) miR-1247-3pexpression levels detected by RT-PCR. (C) Representative images and statistics ofTUNEL staining of N2a cells used to confirm apoptotic changes (100 ). (D) Cleavedcaspase-3 protein levels measured by western blotting. Values are mean ±SEM (n =4 in each group).*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs. ctrl; **P < 0.01, ***P <


本文編號：3304199