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腫瘤相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化和人腦膠質(zhì)瘤臨床預(yù)后相關(guān)性研究

發(fā)布時(shí)間:2021-07-22 00:23
  神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腫瘤,如何進(jìn)一步了解腫瘤發(fā)病的機(jī)理,為治療腦膠質(zhì)瘤探索新的思路和方法,以改善腦膠質(zhì)瘤患者的生存率及生存質(zhì)量,這一直是醫(yī)學(xué)面臨的難題。表觀遺傳學(xué)指研究不引起基因序列改變,但可以影響基因表達(dá)的可遺傳性改變,其中DNA甲基化是人類最為常見(jiàn)的表觀遺傳改變,膠質(zhì)瘤中也存在不同形式的異常甲基化,包括全基因組低甲基化,啟動(dòng)子CpG島高甲基化,這些改變可能導(dǎo)致癌基因的活化和/或抑癌基因的表達(dá)沉默而最終形成腫瘤。本課題旨在研究與神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關(guān)的部分腫瘤基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)與腫瘤患者臨床預(yù)后的相關(guān)性以及對(duì)甲基化狀態(tài)檢測(cè)方法的探究,以期找到一種適合于臨床應(yīng)用的檢測(cè)方法,對(duì)腦膠質(zhì)瘤早期診斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)、預(yù)后評(píng)判、個(gè)體化治療方案的選擇以及進(jìn)一步行分子生物學(xué)治療提供理論依據(jù)。第一部分人腦膠質(zhì)瘤MGMT啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)方法的研究實(shí)驗(yàn)?zāi)康某彩組SP是目前研究MGMT啟動(dòng)子甲基化的方法中比較成熟的種,并已用巢式MSP法建立了MGMT啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的預(yù)測(cè)價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)中,我們用一種靈敏且高通量的實(shí)時(shí)熒光定量的方法(MethyLight)來(lái)檢測(cè)膠質(zhì)瘤MGMT啟動(dòng)子甲基化狀態(tài),對(duì)比分... 

【文章來(lái)源】:復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【部分圖文】:

腫瘤相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化和人腦膠質(zhì)瘤臨床預(yù)后相關(guān)性研究


ACTB和MGMT標(biāo)準(zhǔn)曲線及有效性分析

甲基化,條帶,電泳,樣本


^ .丨“ ,“ j ~actb“ 1 <~ MGMTJ I 1 i 3 4 S S 7 ILeg CORe<dy OMOKIMM圖3 : ACTB和MGMT標(biāo)準(zhǔn)曲線及有效性分析如圖4A所示,巢式MSP檢測(cè)方法中,電泳結(jié)果中出現(xiàn)未甲基化條帶(U),而沒(méi)有出現(xiàn)甲基化條帶(M),則判定該樣本未發(fā)生甲基化;電泳結(jié)果中出現(xiàn)M條帶或者M(jìn)和U條帶均出現(xiàn),則判斷該樣本發(fā)生甲基化。如圖4B所示,實(shí)時(shí)定量MethyLight檢測(cè)方法中,有擴(kuò)增曲線,引物經(jīng)過(guò)驗(yàn)證未出現(xiàn)二聚體,且經(jīng)SDS1.2分析軟件得到的Ct值低于40的,我們認(rèn)為該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有效,然后進(jìn)行分析判定對(duì)應(yīng)的樣本是否發(fā)生甲基化。

曲線,曲線表示,患者,相關(guān)性


圖2 WKaplan-Meier曲線表示CD133啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與患者PFS和OS之間的相關(guān)性。A:用原始的CD133啟動(dòng)+甲基化狀態(tài)分類法得到的Kaplan-Meier曲線;B:用調(diào)整后的CD133啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)分類法得到的Ka plan-Meier曲線。多變量分析證實(shí),CD133未甲基化是獨(dú)立于WHO分級(jí),年齡和手術(shù)切除范圍因素之外導(dǎo)致患者OS較短的預(yù)后因素(HR, 2.87; 95%可信區(qū)間為1.74-4.73;P <0.001);對(duì)于PFS較短的患者來(lái)說(shuō),同樣也存在CD133未甲基化(HR,2.61;95%可信區(qū)間為 1.57-4.34; P <0.001)(見(jiàn)表2)。表2:多因素分析顯示CD133啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)、年齡、手術(shù)切除范圍勾患者PFS及OS的相 ^ PFS (n=152) OS (n=170)變量 HR (95% CI) P HR (95% CI) PCD133 M+, U-/1 1 1甲基化 M+, U+ 1.11 (0.58-2.11) 0.751 1.58 (0.86-2.88) 0.140


本文編號(hào):3296062

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