據(jù)統(tǒng)計,腦膠質(zhì)瘤約占腦部腫瘤的30～40%,而傳統(tǒng)的手術(shù)治療、放療或化療并不能取得理想的治療效果,因此,探尋新的治療方法成為腦膠質(zhì)瘤的研究重點。細胞凋亡在胚胎發(fā)育與組織分化中起著關(guān)鍵作用,細胞凋亡失調(diào)對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展甚為重要,其存在細胞內(nèi)與細胞外兩條途徑�；熕幬稃}酸阿霉素（Doxorubicin, DOX）通過細胞內(nèi)途徑促進腫瘤細胞凋亡；而腫瘤壞死因子家族成員TRAIL （TNF-related apoptosis-inducing ligand）主要通過細胞外途徑促進腫瘤細胞凋亡。本課題以DOX與TRAIL為治療藥物,采用長循環(huán)脂質(zhì)體作為藥物載體,制備復(fù)方脂質(zhì)體（TRAIL-LP/DOX-LP）,以期同時通過細胞內(nèi)途徑與細胞外途徑,發(fā)揮兩種藥物的協(xié)同抗腫瘤作用,延長藥物的體內(nèi)滯留時間,并利用腫瘤的EPR效應(yīng)增加藥物在腫瘤部位的蓄積,促進腫瘤細胞的凋亡,增強抗腫瘤效果。本文第一章為復(fù)方TRAIL/DOX溶液劑的協(xié)同抗腫瘤作用研究。以對TRAIL不敏感的人腦膠質(zhì)瘤細胞U87為研究對象,考察了TRAIL與DOX合用的協(xié)同增效作用,并對其體內(nèi)抗U87腦膠質(zhì)瘤的藥效學(xué)進行了初步探索。結(jié)果表... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 TRAIL與阿霉素的協(xié)同抗腫瘤作用研究
    第一節(jié) TRAIL與阿霉素合用增強對腫瘤細胞的殺傷作用
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
        2 實驗方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 細胞毒研究
            2.3 細胞凋亡檢測
            2.4 細胞周期檢測
        3 實驗結(jié)果
            3.1 單用TRAIL對腫瘤細胞的細胞毒作用
            3.2 TRAIL與阿霉素合用對U87細胞的殺傷作用
                3.2.1 細胞毒作用
                3.2.2 治療指數(shù)(therapeutic index,TI)的評價
            3.3 TRAIL與阿霉素合用對A-549細胞的殺傷作用
                3.3.1 細胞毒作用
                3.3.2 細胞凋亡檢測
                3.3.3 細胞周期檢測
    第二節(jié) TRAIL與阿霉素合用的體內(nèi)藥效學(xué)評價
        1 儀器和材料
        2 實驗方法
            2.1 TRAIL與阿霉素合用對原位腦膠質(zhì)瘤模型的療效評價
                2.1.1 U87原位腦膠質(zhì)瘤模型建立方法的研究
                2.1.2 模型的驗證
                2.1.3 實驗分組及治療方案
            2.2 TRAIL與阿霉素合用對肺癌皮下瘤模型的療效評價
        3 實驗結(jié)果
            3.1 原位腦膠質(zhì)瘤模型的藥效學(xué)評價
                3.1.1 原位腦膠質(zhì)瘤模型的驗證
                3.1.2 原位腦膠質(zhì)瘤模型的藥學(xué)評價
            3.2 肺癌皮下瘤模型的藥效學(xué)評價
        4 討論
            4.1 腫瘤細胞對TRAIL的耐藥機制
            4.2 關(guān)于腦膠質(zhì)瘤模型的建立
            4.3 阿霉素溶液劑對肺癌皮下瘤的體內(nèi)藥效
            4.4 TRAIL與化療藥物合用治療腫瘤的研究進展
    本章小結(jié)
第二章 TRAIL-LP/DOX-LP的制備及其腦膠質(zhì)瘤的被動靶向特性考察
    第一節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP的制備與表征
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
        2 實驗方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 DOX-LP的制備
            2.3 DOX-LP的包封率與釋放度測定
                2.3.1 DOX-LP的包封率測定
                2.3.2 DOX-LP的釋放度測定
            2.4 TRAIL-LP的制備
            2.5 TRAIL-LP的包封率與釋放度測定
                2.5.1 洗脫曲線的制備
                2.5.2 TRAIL-LP的包封率測定
                2.5.3 TRAIL-LP的釋放度測定
            2.6 DOX-LP與TRAIL-LP的粒徑、Zeta電位的測定
            2.7 DOX-LP與TRAIL-LP的穩(wěn)定性考察
        3 實驗結(jié)果
            3.1 脂質(zhì)體的表征
                3.1.1 脂質(zhì)體的包封率、粒徑等考察
                3.1.2 透射電鏡鑒定
            3.2 脂質(zhì)體的釋放度
            3.3 脂質(zhì)體的穩(wěn)定性
    第二節(jié) 脂質(zhì)體的腦膠質(zhì)瘤被動靶向特性考察
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
            1.3 實驗動物
        2 實驗方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 細胞培養(yǎng)
            2.3 荷原位腦膠質(zhì)瘤動物模型的構(gòu)建
            2.4 DiR-LP的制備
            2.5 脂質(zhì)體的腦膠質(zhì)瘤靶向特性考察
        3 實驗結(jié)果
        4 討論
            4.1 復(fù)方脂質(zhì)體的制備方法
            4.2 脂質(zhì)體粒徑大小的控制
            4.3 延長TRAIL體內(nèi)滯留時間的方法
            4.4 小動物活體成像技術(shù)
            4.5 脂質(zhì)體在肝腎的蓄積
    本章小結(jié)
第三章 TRAIL-LP/DOX-LP治療U87腦膠質(zhì)瘤的藥效學(xué)及安全性評價
    第一節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP治療U87腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外藥效學(xué)研究
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
            1.3 實驗動物
        2 實驗方法
            2.1 TRAIL-LP/DOX-LP的體外細胞殺傷作用研究
            2.2 TRAIL-LP/DOX-LP的體內(nèi)藥效學(xué)評價
                2.2.1 組織水平的病理解剖學(xué)評價
                2.2.2 流式細胞儀PI染色檢測凋亡率
                2.2.3 荷瘤鼠生存期評價
                2.2.4 Actived caspase-3表達量的檢測
        3 實驗結(jié)果
            3.1 TRAIL-LP/DOX-LP對體外U87細胞的凋亡作用及抑制率
            3.2 體內(nèi)藥效學(xué)評價
                3.2.1 組織水平的病理解剖學(xué)評價
                3.2.2 流式細胞儀PI染色檢測凋亡率
                3.2.3 荷瘤鼠的生存期評價
                3.2.4 蛋白水平免疫熒光檢測actived caspase-3的表達
    第二節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP治療U87腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外安全性評價
        1 儀器和材料
        2 實驗方法
            2.1 TRAIL-LP/DOX-LP對正常細胞的抑制率及細胞凋亡考察
            2.2 TRAIL-LP/DOX-LP的體內(nèi)安全性評價
        3 實驗結(jié)果
            3.1 TRAIL-LP/DOX-LP對正常細胞的細胞毒作用評價
            3.2 TRAIL-LP/DOX-LP體內(nèi)安全性的初步評價
        4 討論
            4.1 關(guān)于腫瘤大小的評價
            4.2 TRAIL-LP/DOX-LP治療腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)藥效學(xué)評價
            4.3 TRAIL對正常組織的毒性
    本章小結(jié)
第四章 TRAIL-LP/DOX-LP協(xié)同抗腦膠質(zhì)瘤的機理研究
    第一節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP協(xié)同抗腦膠質(zhì)瘤機理的體外研究
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
        2 實驗方法
            2.1 U87細胞的培養(yǎng)
            2.2 U87細胞內(nèi)死亡受體表達的測定
            2.3 U87細胞內(nèi)caspase家族及Bcl-2家族表達的測定
            2.4 U87細胞表面DR4和DR5表達的測定
            2.5 受體阻斷對TRAIL-LP/DOX-LP誘導(dǎo)細胞凋亡的影響測定
        3 實驗結(jié)果
            3.1 DOX-LP對U87細胞內(nèi)死亡受體表達的影響
            3.2 DOX-LP對U87細胞表面死亡受體表達的影響
            3.3 U87細胞死亡受體阻斷實驗
            3.4 TRAIL-LP/DOX-LP對U87細胞內(nèi)caspase表達的影響
            3.5 TRAIL-LP/DOX-LP對U87細胞內(nèi)Bcl家族蛋白表達的影響
    第二節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP協(xié)同抗腦膠質(zhì)瘤機理的體內(nèi)研究
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
            1.3 實驗動物
        2 實驗方法
            2.1 U87原位腦膠質(zhì)瘤模型的建立
            2.2 實驗分組與治療方案
            2.3 蛋白水平免疫熒光檢測DR4與DR5的表達量
        3 實驗結(jié)果
            3.1 荷瘤鼠給藥后體內(nèi)DR5的表達
            3.2 荷瘤鼠給藥后體內(nèi)DR4的表達
        4 討論
            4.1 DR4與DR5在TRAIL誘導(dǎo)的凋亡中的作用
            4.2 關(guān)于體外機理研究的細胞模型選取
    本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
中英文對照表
致謝
在校期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Caspase家族與細胞凋亡[J]. 岳原亦,張揚,張一奇.  中國醫(yī)療前沿. 2011(06)
[2]腫瘤壞死因子誘導(dǎo)凋亡配體TRAIL研究進展[J]. 范開,羅嵐,劉洪洪.  重慶理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2011(02)
[3]小動物活體成像技術(shù)研究進展[J]. 李冬梅,萬春麗,李繼承.  中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報. 2009(06)
[4]腫瘤療效評價研究進展[J]. 程志祥,王科明.  中國腫瘤. 2009(07)
[5]活體動物體內(nèi)成像技術(shù)及其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用進展[J]. 周濤,韓彧,鞏偉麗,趙春林.  中國體視學(xué)與圖像分析. 2007(01)
[6]重組人凋亡素2配體治療晚期惡性腫瘤Ⅰ期臨床耐受性研究[J]. 周生余,陳閃閃,劉鵬,羅揚,邢鐠元,何靜,石遠凱,馮奉儀.  中國新藥雜志. 2007(01)
[7]順鉑和阿霉素對K562細胞周期及凋亡影響的研究[J]. 黃偉,張瑤珍,周劍鋒,劉文勵.  中國病理生理雜志. 2005(03)
[8]Following a TRAIL: Update on a ligand and its five receptors[J]. Fiona C. KIMBERLEY,Gavin R. SCREATON.  Cell Research. 2004(05)

博士論文
[1]抑制p53與MDM2結(jié)合的抗腫瘤多肽設(shè)計與靶向遞送[D]. 李翀.復(fù)旦大學(xué) 2010
[2]功能性Pluronic P123/F127混合膠束用于治療多藥耐藥腫瘤的研究[D]. 張偉.復(fù)旦大學(xué) 2010



本文編號：3289234