目的:膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,是成人顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤,其惡性程度最高的是多形性膠質(zhì)瘤母細(xì)胞瘤（GBM）。因膠質(zhì)母細(xì)胞瘤惡性程度極高,常浸潤周圍腦組織與正常組織分界不清,以致手術(shù)難以完全切除。目前采用手術(shù)、標(biāo)準(zhǔn)放療及化療等綜合治療手段,平均生存期只有14個月,難以治愈。膠質(zhì)瘤患者個體化基因表型的改變可能成為今后治療的突破口。WNK激酶是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,因功能領(lǐng)域缺乏保守的賴氨酸而得此名稱,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)4名成員,分別是WNK1、WNK2、WNK3和WNK4。其中WNK1、WNK2和WNK3已經(jīng)廣泛參與到腫瘤的增殖、凋亡、侵襲以及腫瘤微環(huán)境的過程。認(rèn)為WNK2可能是具有神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤特異性的抑癌基因,WNK1和WNK3參與到腫瘤的侵襲,凋亡。此外,GBM腫瘤內(nèi)廣泛的低氧壞死區(qū)和血管形成,是其突出組織學(xué)的特征。研究顯示,低氧可能導(dǎo)致腫瘤表型發(fā)生改變,包括轉(zhuǎn)移增多、腫瘤復(fù)發(fā)、抗化療、抗放療、侵襲增加、患者生存率下降、基因組不穩(wěn)定、凋亡潛能下降、基因表達(dá)改變、癌基因激活,誘導(dǎo)血管生成等作用。然而,膠質(zhì)瘤適應(yīng)低氧微環(huán)境的分子機(jī)制知之甚少,并且WNK激酶在低氧下對膠質(zhì)瘤的調(diào)控研究尚不明... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

WNK3免疫組織化學(xué)（IHC）在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系的表達(dá)

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3.2 低氧條件下 WNK3 在 U87 細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)Western blot 檢測低氧和常氧條件下 WNK3 在 U87 細(xì)胞系中的表達(dá)。細(xì)胞在常氧和低氧（1%氧 1 h、3 h、6 h、12 h、24 h）條件下培養(yǎng)并測定 WNK3 表達(dá)水平（圖2A）。在低氧條件下培養(yǎng) U87 細(xì)胞 WNK3 表達(dá)上調(diào)（圖 2B），并且發(fā)現(xiàn) WNK3 表達(dá)水平在低氧培養(yǎng) 24 小時后最高（P＜0.001）。

圖 3.3 WNK3 敲除顯著抑制低氧下 U87 細(xì)胞侵襲A：轉(zhuǎn)染敲除 U87 細(xì)胞中 WNK3 表達(dá)后通過 Western blot 驗(yàn)證，β實(shí)相關(guān)蛋白表達(dá)（A）驗(yàn)證結(jié)果。C：結(jié)晶紫染色檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染后 U87 細(xì)胞侵襲常氧和低氧培養(yǎng)條件下，Transwell 侵襲小室中轉(zhuǎn)染后的 U87 細(xì)胞數(shù)量。*P***P < 0.001。3.4 WNK3 通過誘導(dǎo) EMT 調(diào)控低氧環(huán)境下 U87 細(xì)胞侵為了進(jìn)一步研究在 U87 細(xì)胞侵襲 WNK3 的作用，我們檢測了Snail1、Vimentin 在 WNK3 shRNA U87 細(xì)胞和對照轉(zhuǎn)染組細(xì)胞在 WNK3 shRNAU87 細(xì)胞中，Snail1 和 Vimentin 表達(dá)水平在常氧（P＜0.001）培養(yǎng)條件下顯著降低（圖 4A，B）。更重要的是胞中，Snail1 和 Vimentin 的表達(dá)在低氧下更加顯著（圖 4）。E-cadherin，這是一個在 EMT 過程中被下調(diào)的標(biāo)記。E-cadherin 的


本文編號：3280212