發(fā)布時(shí)間：2021-07-10 23:01

　　目的：膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性腦部腫瘤,且多數(shù)切除后有復(fù)發(fā)可能。目前,針對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡等方面的研究十分普遍。臨床上使用的抗腫瘤藥物大都是通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡來發(fā)揮作用的。PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在多種惡性腫瘤中過度激活,調(diào)控惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。mTOR是PI3K/Akt信號(hào)通路下游重要的激酶,參與調(diào)控包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的生存和增殖。雷帕霉素是mTOR的抑制劑,能通過抑制mTOR的活性,參與調(diào)控PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在惡性腫瘤細(xì)胞中的作用。然而,關(guān)于雷帕霉素治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的作用及相關(guān)分子機(jī)制尚未研究清楚。在惡性腫瘤細(xì)胞中,糖酵解水平異常升高,多種糖酵解酶的表達(dá)和活性被過度激活,提示糖酵解途徑可能為抗癌治療提供豐富的靶點(diǎn)。最近有研究報(bào)道,microRNA-143受mTOR通路調(diào)控,且在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常下調(diào),其靶基因包括糖酵解關(guān)鍵限速酶己糖激酶2（HK2）。然而,關(guān)于mTOR通路、miRNA-143以及糖酵解途徑在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的調(diào)控作用及三者之間的關(guān)系尚不清楚。本研究利用人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251和CHG-5,探索雷帕... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞
技術(shù)路線圖
引言
第一章 雷帕霉素對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    前言
    1、材料與方法
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及實(shí)驗(yàn)試劑
            1.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
            1.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞處理
        2.3 MTT檢測(cè)
        2.4 Annexin V-FITC&PI凋亡檢測(cè)
        2.5 蛋白樣品的制備與濃度測(cè)定
        2.6 Western Blot檢測(cè)
        2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和CHG-5細(xì)胞增殖的影響
        3.2 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和CHG-5細(xì)胞凋亡的影響
        3.3 Western Blot檢測(cè)Rapamycin對(duì)人膠質(zhì)瘤U251和CHG-5細(xì)胞中mTOR活性的影響
    4. 討論
第二章 雷帕霉素通過下調(diào)糖酵解水平抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤的增殖
    前言
    一、雷帕霉素處理對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖酵解水平的影響
        1、材料
            1.1 細(xì)胞系
                1.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
                1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2、實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 細(xì)胞處理
            2.3 葡萄糖攝取檢測(cè)
            2.4 乳酸分泌檢測(cè),見上海研瑾生物科技人乳酸試劑盒說明書
            2.5 統(tǒng)計(jì)分析
        3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞葡糖糖攝取的影響
                3.1.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞葡糖糖攝取的影響
                3.1.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞葡糖糖攝取能力的影響
            3.2 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞乳酸分泌的影響
                3.2.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞乳酸分泌的影響
                3.2.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞乳酸分泌的影響
        4、討論
    二、雷帕霉素處理對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖酵解酶的表達(dá)及活性的影響
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞系
                1.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
                1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2、實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 細(xì)胞處理
            2.3 Western Blotting
            2.4 己糖激酶活性檢測(cè)
            2.5 丙酮酸激酶活性檢測(cè)
            2.6 乳酸脫氫酶活性檢測(cè)
            2.7 統(tǒng)計(jì)分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞己糖激酶活性的影響
                3.1.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞己糖激酶活性的影響
                3.1.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞己糖激酶活性的影響
            3.2 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞丙酮酸激酶活性的影響
                3.2.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞丙酮酸激酶活性的影響
                3.2.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞丙酮酸激酶活性的影響
            3.3 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)活性的影響
                3.3.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞乳酸脫氫酶活性的影響
                3.3.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞乳酸脫氫酶活性的影響
            3.4 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞己糖激酶蛋白表達(dá)的影響
                3.4.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞己糖激酶蛋白表達(dá)的影響
                3.4.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞己糖激酶蛋白表達(dá)的影響
            3.5 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞丙酮酸激酶蛋白表達(dá)的影響
                3.5.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞丙酮酸激酶蛋白表達(dá)的影響
                3.5.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞丙酮酸激酶蛋白表達(dá)的影響
            3.6 雷帕霉素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞乳酸脫氫酶蛋白表達(dá)的影響
                3.6.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞乳酸脫氫酶蛋白表達(dá)的影響
                3.6.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞乳酸脫氫酶蛋白表達(dá)的影響
        4、討論
    三、雷帕霉素處理對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞miR-143表達(dá)的影響
        1、材料
            1.1 細(xì)胞系
            1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
            1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2、實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 引物設(shè)計(jì)
            2.3 細(xì)胞處理
            2.4 總RNA抽提
            2.5 基因組DNA的去除
            2.6 miRNA-PolyA標(biāo)記與RT反應(yīng)
            2.7 miRNA-定量PCR檢測(cè)
            2.8 統(tǒng)計(jì)分析
        3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 雷帕霉素對(duì)U251細(xì)胞中miR-143表達(dá)的影響
            3.2 雷帕霉素對(duì)CHG-5細(xì)胞中miR-143表達(dá)的影響
        4、討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間主要的研究成果



本文編號(hào)：3276812