目的：杜興肌肉萎縮癥是一種由dystrophin基因突變,導(dǎo)致dystrophin蛋白缺失所引發(fā)的致死性神經(jīng)肌肉失調(diào)癥,本研究利用杜興肌肉萎縮癥疾病細(xì)胞和動物模型來測試一種新的反義寡核苷酸化學(xué)結(jié)構(gòu)-2’-O-甲氧乙基（2’-O-MOE）,通過對該反義寡核苷酸化學(xué)結(jié)構(gòu)的體外、體內(nèi)局部和系統(tǒng)的測試,其中包括系統(tǒng)給藥劑量和給藥途徑的優(yōu)化,預(yù)期為杜興肌肉萎縮癥反義寡核苷酸介導(dǎo)的外顯子跳讀的基因治療方法提供一種候選的反義寡核苷酸藥物。與此同時,通過對熒光標(biāo)記的2’-O-MOE反義寡核苷酸藥物體外和體內(nèi)試驗,來測試該反義寡核苷酸藥物在肌肉細(xì)胞內(nèi)的定位和攝取效率及在實驗動物各組織內(nèi)的分布情況。方法：1.濃度效應(yīng)試驗中將300nM、500nM、1μM不同長度和骨架修飾的2’-O-MOE包括MOE20（PS）.MOE25（PS）和MOE25（PO）反義寡核苷酸藥物通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染H?K mdx細(xì)胞48h后,利用RT-PCR技術(shù)檢測其誘導(dǎo)外顯子23跳讀的效率。2.時間效應(yīng)試驗中將500nM不同長度和骨架修飾的2’-O-MOE反義寡核苷酸藥物通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染H2K mdx細(xì)胞24h、48h、72h、96h后,利... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
對象和方法
    1 實驗材料
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 實驗動物
        1.3 反義寡核苷酸藥物
        1.4 常用試劑
        1.5 主要儀器設(shè)備
        1.6 引物
        1.7 主要分析工具軟件
    2 實驗方法
        2.1 試劑配制
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞
        2.4 TRIzol法提取細(xì)胞總RNA
        2.5 RT-PCR和PCR反應(yīng)條件
        2.6 組織總蛋白的提取
        2.7 蛋白濃度測定
        2.8 WST-8試劑盒檢測反義寡核苷酸毒性
        2.9 免疫熒光組織化學(xué)檢測
        2.10 Western blot
        2.11 局部肌肉注射
        2.12 系統(tǒng)注射
        2.13 FACS流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和熒光強(qiáng)度
        2.14 共聚焦熒光顯微鏡分析
        2.15 組織中熒光標(biāo)記MOE25(PS)的定量分析
    3 統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    1 2'-O-MOE反義寡核苷酸在H_2K mdx細(xì)胞的體外測試
        1.1 濃度效應(yīng)及細(xì)胞毒性分析
        1.2 時間效應(yīng)
        1.3 不同MOE反義寡核苷酸與臨床上測試的2'OmePS藥物的比較分析
    2 2 '-O-MOE反義寡核苷酸在DMD小鼠模型上的局部和系統(tǒng)測試
        2.1 局部肌肉測試
        2.2 MOE25(PS)反義寡核苷酸在mdx小鼠上的系統(tǒng)測試
    3 MOE25(PS)反義寡核苷酸在體內(nèi)的組織分布與細(xì)胞內(nèi)的攝取及共定位
        3.1 MOE25(PS)在mdx小鼠的體內(nèi)各組織分布情況
        3.2 熒光標(biāo)記MOE25(PS)在H_2K mdx細(xì)胞的攝取和細(xì)胞內(nèi)共定位情況
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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