本文關(guān)鍵詞：人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的干細(xì)胞特性及誘導(dǎo)分化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的干細(xì)胞特性和多向分化潛能的相關(guān)研究,揭示膠質(zhì)瘤細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)特性;進(jìn)一步研究膠質(zhì)瘤細(xì)胞向脂肪細(xì)胞及成骨細(xì)胞分化的條件及可能的機(jī)制;進(jìn)一步展望誘導(dǎo)分化方法作為一種新穎的腦膠質(zhì)瘤治療方法的臨床應(yīng)用前景。方法:常規(guī)傳代培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251,并將U251細(xì)胞傳代培養(yǎng)于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,恒溫CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后,用4%多聚甲醛固定U251細(xì)胞,并檢測(cè)U251中干細(xì)胞標(biāo)志物Sall4、NCAM、Oct4、Sox2、Nestin、和S100β表達(dá)情況,熒光顯微鏡下觀察U251細(xì)胞上述標(biāo)志物的表達(dá)情況。將貼壁生長(zhǎng)的U251細(xì)胞分別經(jīng)成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基(含有2μmol/L胰島素、500μmol/L(IBMX)、1μmol/L地塞米松、200μmol/L吲哚美辛)和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基(含有100mmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉及0.05mmol/L維生素C)誘導(dǎo)分化后,分別用油紅O染色方法檢測(cè)細(xì)胞中脂滴形成情況,茜素紅染色檢測(cè)細(xì)胞中鈣結(jié)節(jié)形成情況。CCK8法檢測(cè)經(jīng)誘導(dǎo)分化后U251細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。免疫蛋白印跡法分別測(cè)定脂肪細(xì)胞和成骨特異性蛋白表達(dá)以及誘導(dǎo)分化過(guò)程中細(xì)胞自噬和凋亡蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.多種干細(xì)胞標(biāo)志物均在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251中穩(wěn)定表達(dá)。免疫熒光結(jié)果顯示在U251中神經(jīng)細(xì)胞黏附分子NCAM、神經(jīng)嵴干細(xì)胞標(biāo)記物Nestin、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物S100β,多能干細(xì)胞標(biāo)記物Sall4、Oct4及神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記物Sox2均能夠穩(wěn)定表達(dá)。2.U251細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后可以向脂肪細(xì)胞分化。在貼壁生長(zhǎng)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中加入成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基后,經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)不同的時(shí)間梯度,油紅O染色發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中出現(xiàn)脂滴,并且隨著誘導(dǎo)的時(shí)間越長(zhǎng),脂滴數(shù)量增多并融合增大,且細(xì)胞增殖速度減慢,這點(diǎn)由CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果得以證實(shí)。通過(guò)免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)后的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中脂肪細(xì)胞相關(guān)特異性蛋白表達(dá)增加。3.U251細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)可以向成骨細(xì)胞分化。在貼壁生長(zhǎng)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中加入成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基后,經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)不同的時(shí)間梯度,茜素紅染色發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié),并且隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),鈣結(jié)節(jié)增多。CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示經(jīng)誘導(dǎo)分化后腫瘤細(xì)胞增殖減慢;免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示成骨細(xì)胞相關(guān)特異性蛋白表達(dá)增多,并且隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡、自噬及增殖相關(guān)蛋白表達(dá)也增加。結(jié)論:1.人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251具有干細(xì)胞特性和多向誘導(dǎo)分化潛能,在一定條件能夠被誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞。2.誘導(dǎo)分化劑能夠抑制細(xì)胞增殖,并能夠促進(jìn)U251細(xì)胞發(fā)生終末分化并出現(xiàn)細(xì)胞自噬和凋亡現(xiàn)象。3.誘導(dǎo)分化方法能夠作為人膠質(zhì)瘤是一種潛在的、有效的新型治療方法。
【關(guān)鍵詞】：腦膠質(zhì)瘤 誘導(dǎo)分化 干細(xì)胞特性 細(xì)胞凋亡 自噬
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 中英文對(duì)照表9-13
• 第一章 緒論13-17
• 1.1 膠質(zhì)瘤13
• 1.2 腫瘤干細(xì)胞13-14
• 1.3 誘導(dǎo)分化治療14-15
• 1.4 研究的內(nèi)容、方法、目的、意義及技術(shù)路線15-17
• 第二章 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)及干細(xì)胞特性鑒定17-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2.1.1 細(xì)胞株：人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞購(gòu)于上海細(xì)胞庫(kù)，，由本實(shí)驗(yàn)室保存于液氮。17
• 2.1.2 主要試劑和試劑盒：17
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備及耗材：17-18
• 2.1.4 主要試劑的配制18-19
• 2.2 試驗(yàn)方法19-20
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19-20
• 2.2.2 免疫熒光鑒定膠質(zhì)瘤細(xì)胞的干細(xì)胞特性20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-21
• 2.4 討論21-23
• 第三章 體外誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化23-35
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料23-26
• 3.1.1 細(xì)胞株23
• 3.1.2 主要試劑和試劑盒23-24
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備及器材24
• 3.1.4 主要試劑的配制24-26
• 3.2 試驗(yàn)方法26-30
• 3.2.1 U251細(xì)胞向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化26
• 3.2.2 油紅O染色26-27
• 3.2.3 免疫蛋白印跡法測(cè)定脂肪細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)27-29
• 3.2.4 CCK8法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定29-30
• 3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-33
• 3.3.1 油紅O染色結(jié)果30-31
• 3.3.2 免疫印跡結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析31-33
• 3.3.3 經(jīng)成脂誘導(dǎo)分化后U251細(xì)胞生長(zhǎng)曲線33
• 3.4 討論33-35
• 第四章 體外誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化35-42
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 4.1.1 細(xì)胞株35
• 4.1.2 主要試劑和試劑盒35-36
• 4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和耗材36
• 4.1.4 主要試劑的配制36
• 4.2 試驗(yàn)方法36-37
• 4.2.1 U251細(xì)胞的向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化36
• 4.2.2 茜素紅染色36-37
• 4.2.3 免疫蛋白印跡法檢測(cè)成骨細(xì)胞相關(guān)特異性蛋白表達(dá)37
• 4.2.4 CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定37
• 4.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析37
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-40
• 4.3.1 茜素紅染色結(jié)果37-38
• 4.3.2 免疫印跡結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析38-39
• 4.3.3 經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化后U251細(xì)胞生長(zhǎng)曲線39-40
• 4.4 討論40-42
• 實(shí)驗(yàn)總結(jié)及展望42-43
• 1.實(shí)驗(yàn)總結(jié)42
• 2.展望42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 綜述49-62
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章62-63
• 致謝63

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7 楊景全;高偉陽(yáng);陳星隆;李志杰;丁健;周飛亞;;大鼠脊髓勻漿上清液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化影響[A];第一屆長(zhǎng)三角地區(qū)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

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