目的：研究Shh蛋白對(duì)大鼠永久性腦缺血模型的保護(hù)作用及其潛在機(jī)制。方法：原代大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞1-2代后，應(yīng)用糖氧剝奪模擬體外缺血模型，分別給予rHu Shh、Cyclopamine預(yù)處理，選取2小時(shí)、4小時(shí)或6小時(shí)三個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)為檢測(cè)終點(diǎn)，用MTT法或BrdU染色法檢測(cè)細(xì)胞存活和細(xì)胞增殖；建立大鼠永久性腦缺血模型，側(cè)腦室注射rHu Shh或PBS，觀察神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，應(yīng)用TTC法檢測(cè)腦梗塞面積，干濕稱(chēng)重法檢測(cè)腦水腫，依文思藍(lán)外滲法檢測(cè)血腦屏障通透性，激光散斑襯比技術(shù)檢測(cè)皮層血流灌注，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)缺血梗塞區(qū)邊緣CD31和α-SMA的陽(yáng)性表達(dá)，用CD31和Ki-67兩種抗體進(jìn)行免疫熒光雙標(biāo)，用共聚焦顯微鏡觀察缺血梗塞區(qū)邊緣內(nèi)皮細(xì)胞增殖狀況。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)Sonic hedgehog（Shh）信號(hào)通路中的關(guān)鍵成份（Shh，Patched-1，Gli-1）及血管新生因子（VEGF、Ang-1和Ang-2）的mRNA水平，用免疫印跡法（Western blotting）檢測(cè)上述因子的蛋白水平。結(jié)果：1)rHu Shh可促進(jìn)OGD處理下原代培養(yǎng)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活和... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

與1B原代培養(yǎng)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定：1A:相差顯微鏡下觀察腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞；1B：免疫熒光染色示VIII因子表達(dá)陽(yáng)性，DAPI染細(xì)

CWesternblotting顯示Shh信號(hào)通路分子的Patched-1的蛋白表達(dá)水平

AHE染色顯示缺血梗塞區(qū)邊緣（peri-infarctedarea）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Interaction of L-Arginine-methyl ester and Sonic hedgehog in liver ischemia-reperfusion injury in the rats[J]. Mehmet Cudi Tuncer,Hayrettin Ozturk,Huseyin Buyukbayram,Hulya Ozturk.  World Journal of Gastroenterology. 2007(28)



本文編號(hào)：3232790