本文關(guān)鍵詞：鞘氨醇激酶-2在原代鼠皮層神經(jīng)元激活自噬介導(dǎo)缺血耐受，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究旨在探索鞘氨醇激酶-2(SPK2)是否參與神經(jīng)元異氟醚預(yù)適應(yīng)激活自噬,進而研究SPK2是否通過激活自噬而保護神經(jīng)元缺血損傷,初步探索SPK2激活自噬的分子機制。方法:采用體外培養(yǎng)小鼠原代皮層神經(jīng)元,建立異氟醚預(yù)適應(yīng)(Isoflurane preconditioning,ISO)和缺糖缺氧(oxygen glucose dripivation,OGD)模型。利用si RNA分別干擾原代皮層神經(jīng)元SPK2和Beclin 1的表達(dá),用慢病毒感染原代皮層神經(jīng)元實現(xiàn)SPK2過表達(dá)。利用免疫熒光和Western blot檢測SPK2感染率和蛋白表達(dá);檢測自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1的表達(dá),應(yīng)用溶酶體抑制劑氯化銨(NH4Cl)檢測自噬流。利用細(xì)胞計數(shù)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)檢測SPK2對OGD/R誘導(dǎo)神經(jīng)元死亡的保護作用,應(yīng)用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)檢測自噬在SPK2致神經(jīng)元缺血耐受中的作用。利用免疫共沉淀檢測Beclin1與Bcl-2之間的相互作用。結(jié)果:在原代皮層神經(jīng)元中,ISO增強SPK2和LC3的免疫熒光。SPK2 si RNA降低ISO誘導(dǎo)的LC3II上調(diào),Beclin 1 si RNA也抑制ISO誘導(dǎo)的LC3II上調(diào)。神經(jīng)元慢病毒過表達(dá)SPK2使LC3II表達(dá)增加,并增加自噬流量,過表達(dá)SPK2對神經(jīng)元的OGD模型具有保護作用,表現(xiàn)為改善神經(jīng)元形態(tài)損傷,增加神經(jīng)元細(xì)胞活力,降低LDH漏出率,而3-MA取消了這種保護作用。過表達(dá)SPK2后,Beclin 1 si RNA抑制過表達(dá)SPK2誘導(dǎo)的LC3II上調(diào);過表達(dá)SPK2后,Beclin 1與Bcl-2相互結(jié)合減少。結(jié)論:神經(jīng)元異氟醚預(yù)適應(yīng)上調(diào)SPK2并激活自噬。干擾SPK2和Beclin 1取消預(yù)適應(yīng)引起的自噬激活,而過表達(dá)SPK2激活自噬,對神經(jīng)元的缺血損傷具有保護作用。SPK2可能通過解離Beclin 1與Bcl-2,促進Beclin 1釋放而誘導(dǎo)自噬。
【關(guān)鍵詞】：SPK2 異氟醚 預(yù)適應(yīng) 神經(jīng)保護 自噬 原代皮層神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 前言8-12
• 第一部分 神經(jīng)細(xì)胞異氟醚預(yù)適應(yīng)對SPK2 和自噬的影響12-26
• 第一節(jié) 原代皮層神經(jīng)元異氟醚預(yù)適應(yīng)上調(diào)SPK2 和激活自噬12-18
• 材料與方法12-15
• 實驗結(jié)果15-17
• 小結(jié)17-18
• 第二節(jié) 抑制SPK2 對神經(jīng)細(xì)胞自噬激活的影響18-26
• 材料與方法18-21
• 實驗結(jié)果21-25
• 小結(jié)25-26
• 第二部分 過表達(dá)SPK2 對神經(jīng)元自噬激活的影響26-41
• 第一節(jié) SPK2 過表達(dá)對神經(jīng)元自噬激活和缺血損傷的影響26-37
• 材料與方法26-28
• 實驗結(jié)果28-36
• 小結(jié)36-37
• 第二節(jié) 神經(jīng)元過表達(dá)SPK2 激活自噬的分子機制37-41
• 材料與方法37-38
• 實驗結(jié)果38-40
• 小結(jié)40-41
• 討論41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-47
• 綜述47-58
• 參考文獻53-58
• 英文縮寫詞表58-59
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文59-60
• 致謝60-61

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