目的:神經(jīng)母細(xì)胞瘤（neuroblastoma,NB）是兒童最常見的顱外實(shí)體惡性腫瘤,起源于神經(jīng)嵴,常原發(fā)于腎上腺,其死亡率約占兒童腫瘤死亡率的15%。根據(jù)已明確的預(yù)后因素,包括確診年齡、國際神經(jīng)母細(xì)胞瘤分期系統(tǒng)（INSS）、組織病理學(xué)、DNA指數(shù)和MYCN基因擴(kuò)增情況,將患者分為低危、中危和高危組。高危組患者預(yù)后較差且易復(fù)發(fā),其中腫瘤耐藥是治療過程中存在的最大障礙。因此,尋求新的藥物以提高NB患者治療效果并改善預(yù)后的愿望尤為迫切。Akt是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,在多種腫瘤中發(fā)揮重要作用。在NB腫瘤組織中可以檢測到Akt活性增強(qiáng),Akt活性增強(qiáng)的NB患者往往預(yù)后較差,表明NB患者的預(yù)后與Akt的活化有著密切聯(lián)系。MK-2206是Akt的特異性抑制劑,我們前期研究發(fā)現(xiàn)MK-2206作為單一藥物不僅具有抑制NB細(xì)胞體內(nèi)體外生長的作用,而且能夠提高NB細(xì)胞對化療藥物的敏感性。有研究人員發(fā)現(xiàn),MK-2206與mTOR抑制劑RAD001聯(lián)合治療肝癌和膽管癌細(xì)胞具有協(xié)同作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn),MK-2206和mTOR抑制劑rapamycin聯(lián)合應(yīng)用時(shí)在某些NB細(xì)胞中產(chǎn)生明顯的協(xié)同作用,這些NB細(xì)胞... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用通過自噬和程序性壞死誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞死亡
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8細(xì)胞增殖檢測
            2.2.3 IncuCyte Zoom變焦活細(xì)胞成像
            2.2.4 YOYO-1染色
            2.2.5 透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)
            2.2.6 Western Blot
            2.2.7 NB荷瘤裸鼠模型建立、處理及取材
            2.2.8 HE染色
            2.2.9 免疫組織化學(xué)染色
            2.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用治療NB細(xì)胞具有協(xié)同作用并且不依賴于caspase
        3.2 基因芯片檢測
        3.3 細(xì)胞自噬介導(dǎo)MK-2206和rapamycin聯(lián)合誘導(dǎo)的NB細(xì)胞
        3.4 細(xì)胞程序性壞死介導(dǎo)MK-2206和rapamycin聯(lián)合誘導(dǎo)的NB細(xì)胞
        3.5 MK-2206和rapamycin聯(lián)合誘導(dǎo)裸鼠NB腫瘤組織中的細(xì)胞死亡及自噬和程序性壞死相關(guān)分子變化
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8細(xì)胞增殖檢測
            2.2.3 IncuCyte Zoom變焦活細(xì)胞成像
            2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA(以6cm培養(yǎng)皿為例）
            2.2.5 質(zhì)粒提取
            2.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒(以6cm培養(yǎng)皿為例）
            2.2.7 Western Blot
            2.2.8 Seahorse能量代謝分析
            2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 沉默MYCN基因可逆轉(zhuǎn)MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡
            3.1.1 在NGP、BE2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA沉默MYCN基因
            3.1.2 沉默MYCN基因可逆轉(zhuǎn)MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)的NB細(xì)胞死亡
        3.2 過表達(dá)MYCN可增加NB細(xì)胞對MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用的敏感性
            3.2.1 在AS、SY5Y細(xì)胞中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒使MYCN基因過表達(dá)
            3.2.2 過表達(dá)MYCN可增加NB細(xì)胞對MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用的敏感性
        3.3 MK-2206和rapamycin聯(lián)合處理NGP細(xì)胞后糖酵解功能受損
        3.4 MYCN表達(dá)水平對NB細(xì)胞糖酵解及線粒體氧化磷酸化水平的影響
            3.4.1 MYCN表達(dá)水平對NB細(xì)胞糖酵解水平的影響
            3.4.2 MYCN表達(dá)水平對NB細(xì)胞線粒體氧化磷酸化水平的影響
            3.4.3 MYCN表達(dá)水平對NB細(xì)胞代謝潛力的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
本研究的創(chuàng)新性評價(jià)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Targeting uptake transporters for cancer imaging and treatment[J]. Yuchen Zhang,Joanne Wang.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2020(01)



本文編號：3207704