目的：目前研究表明，Cx43Ser368位點磷酸化狀態(tài)對Cx43縫隙連接通道功能有著重要的影響，此位點磷酸化可通過調(diào)節(jié)Cx43蛋白的代謝過程以及Cx43通道的通透性和電導率等，調(diào)節(jié)縫隙連接通道功能。通過枕大池穿刺二次注血方法構(gòu)建的蛛網(wǎng)膜下腔出血模型中，運用特異性抗Cx43Ser368磷酸化抗體檢測痙攣腦血管中蛋白表達情況時發(fā)現(xiàn)：Cx43Ser368位點磷酸化水平與腦血管痙攣程度成正相關(guān)。為此，本次實驗旨在改變腦血管壁細胞中Cx43Ser368位點的磷酸化水平，觀察Cx43Ser368位點磷酸化水平的改變對腦血管痙攣程度的影響。通過上述研究進一步明確蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的病理機制，為預防和治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣疾病尋找新的有效方法。方法：1、構(gòu)建Cx43Ser368A慢病毒載體：以pCMV-Cx43cDNA質(zhì)粒為模板克隆出目的基因Cx43cDNA，并應用PCR技術(shù)定點突變Cx43Ser368位點。運用Gateway技術(shù)構(gòu)建真核表達載體PLV.Ex3d.p/neo-EF1A<Cx43>IRES/EGFP質(zhì)粒。篩選陽性質(zhì)粒并測序鑒定，將含有突變Cx43Ser368A... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 前言
第2章 實驗材料與儀器
    2.1 實驗動物
    2.2 實驗試劑
        2.2.1 主要購置試劑
        2.2.2 主要配置試劑
    2.3 實驗設(shè)備
第3章 實驗方法
    3.1 Cx43 Ser368A 慢病毒載體構(gòu)建
        3.1.1 Cx43 cDNA 的擴增
        3.1.2 PCR 產(chǎn)物分離與回收
        3.1.3 點突變 Cx43，PCR 擴增 attB1- Cx43-attB2
        3.1.4 構(gòu)建 pDown-Cx43
IRES/EGFP">        3.1.5 構(gòu)建 PLV.Ex3d.p/neo-EF1AIRES/EGFP

        3.1.6 病毒包裝
        3.1.7 滴度測定
    3.2 動物模型的構(gòu)建
        3.2.1 模型構(gòu)建方法
        3.2.2 模型鑒定
    3.3 游離血管環(huán)張力實驗和游離血管條孵育實驗
        3.3.1 實驗分組
        3.3.2 血管環(huán)和血管條的制作
        3.3.3 游離血管環(huán)張力實驗
        3.3.4 游離血管條孵育實驗
    3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
第4章 實驗結(jié)果
IRES/EGFP 質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果">    4.1 PLV.Ex3d.p/neo-EF1AIRES/EGFP 質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果

    4.2 慢病毒包裝和滴度測定結(jié)果
    4.3 慢病毒感染模型的鑒定
    4.4 血管環(huán)張力實驗結(jié)果
    4.5 體外腦血管條孵育實驗結(jié)果
第5章 討論
    5.1 SAH 與 DIND
    5.2 CVS 與 DIND
    5.3 CVS 發(fā)生機制
    5.4 CVS 的臨床治療研究
    5.5 縫隙連接簡介
    5.6 縫隙連接與血管生理功能調(diào)節(jié)
    5.7 腦血管痙攣與縫隙連接
    5.8 Cx43 和磷酸化
    5.9 Cx43 Ser368 位點作用
    5.10 存在的問題和展望
第6章 結(jié)論
致謝
參考文獻
附圖
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3193368

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