目的：目前研究表明，Cx43Ser368位點(diǎn)磷酸化狀態(tài)對(duì)Cx43縫隙連接通道功能有著重要的影響，此位點(diǎn)磷酸化可通過(guò)調(diào)節(jié)Cx43蛋白的代謝過(guò)程以及Cx43通道的通透性和電導(dǎo)率等，調(diào)節(jié)縫隙連接通道功能。通過(guò)枕大池穿刺二次注血方法構(gòu)建的蛛網(wǎng)膜下腔出血模型中，運(yùn)用特異性抗Cx43Ser368磷酸化抗體檢測(cè)痙攣腦血管中蛋白表達(dá)情況時(shí)發(fā)現(xiàn)：Cx43Ser368位點(diǎn)磷酸化水平與腦血管痙攣程度成正相關(guān)。為此，本次實(shí)驗(yàn)旨在改變腦血管壁細(xì)胞中Cx43Ser368位點(diǎn)的磷酸化水平，觀察Cx43Ser368位點(diǎn)磷酸化水平的改變對(duì)腦血管痙攣程度的影響。通過(guò)上述研究進(jìn)一步明確蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的病理機(jī)制，為預(yù)防和治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣疾病尋找新的有效方法。方法：1、構(gòu)建Cx43Ser368A慢病毒載體：以pCMV-Cx43cDNA質(zhì)粒為模板克隆出目的基因Cx43cDNA，并應(yīng)用PCR技術(shù)定點(diǎn)突變Cx43Ser368位點(diǎn)。運(yùn)用Gateway技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)載體PLV.Ex3d.p/neo-EF1A<Cx43>IRES/EGFP質(zhì)粒。篩選陽(yáng)性質(zhì)粒并測(cè)序鑒定，將含有突變Cx43Ser368A... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.1 主要購(gòu)置試劑
        2.2.2 主要配置試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 Cx43 Ser368A 慢病毒載體構(gòu)建
        3.1.1 Cx43 cDNA 的擴(kuò)增
        3.1.2 PCR 產(chǎn)物分離與回收
        3.1.3 點(diǎn)突變 Cx43，PCR 擴(kuò)增 attB1- Cx43-attB2
        3.1.4 構(gòu)建 pDown-Cx43
IRES/EGFP">        3.1.5 構(gòu)建 PLV.Ex3d.p/neo-EF1AIRES/EGFP

        3.1.6 病毒包裝
        3.1.7 滴度測(cè)定
    3.2 動(dòng)物模型的構(gòu)建
        3.2.1 模型構(gòu)建方法
        3.2.2 模型鑒定
    3.3 游離血管環(huán)張力實(shí)驗(yàn)和游離血管條孵育實(shí)驗(yàn)
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)分組
        3.3.2 血管環(huán)和血管條的制作
        3.3.3 游離血管環(huán)張力實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 游離血管條孵育實(shí)驗(yàn)
    3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
IRES/EGFP 質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果">    4.1 PLV.Ex3d.p/neo-EF1AIRES/EGFP 質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果

    4.2 慢病毒包裝和滴度測(cè)定結(jié)果
    4.3 慢病毒感染模型的鑒定
    4.4 血管環(huán)張力實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.5 體外腦血管條孵育實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第5章 討論
    5.1 SAH 與 DIND
    5.2 CVS 與 DIND
    5.3 CVS 發(fā)生機(jī)制
    5.4 CVS 的臨床治療研究
    5.5 縫隙連接簡(jiǎn)介
    5.6 縫隙連接與血管生理功能調(diào)節(jié)
    5.7 腦血管痙攣與縫隙連接
    5.8 Cx43 和磷酸化
    5.9 Cx43 Ser368 位點(diǎn)作用
    5.10 存在的問(wèn)題和展望
第6章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附圖
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]蛛網(wǎng)膜下腔出血量與腦血管痙攣兔基底動(dòng)脈Cx43蛋白表達(dá)相關(guān)性研究[J]. 羅軍,婁建云,洪濤.  贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2010(02)
[4]RNA干擾抑制血管平滑肌細(xì)胞縫隙連接Cx43介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊[J]. 洪濤,馮九庚,蔣麗萍,段劍,汪陽(yáng),江志群.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2006(06)
[5]終池持續(xù)引流對(duì)急性重型顱腦損傷患者血漿中ET CGRP含量及腦血管痙攣指數(shù)的影響[J]. 張衛(wèi)華,黃勤,梁兆煜,汪寶貞,彭文輝,潘漢杰,陳保忠.  中國(guó)急救醫(yī)學(xué). 2003(07)



本文編號(hào)：3193368

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