目的:研究LUC7L3是否影響惡性腦膜瘤細(xì)胞的增殖和侵襲,探討LUC7L3是否通過YAP1信號通路發(fā)揮作用。方法:1.通過慢病毒感染惡性腦膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞株,分別沉默和過表達(dá)LUC7L3。實(shí)驗(yàn)分五組:空白組（Blank）,沉默陰性對照組（NC-sh）,沉默LUC7L3組（LUC7L3-sh）,過表達(dá)陰性對照組（NC-ox）,過表達(dá)LUC7L3組（LUC7L3-ox）。使用q-PCR、Western blot方法檢測各組細(xì)胞LUC7L3 mRNA和蛋白表達(dá)水平。2.通過CCK8、平板克隆實(shí)驗(yàn)、EdU增殖實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞周期變化。3.通過劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)觀察各組細(xì)胞遷移和侵襲情況。4.Western blot法檢測各組細(xì)胞中LUC7L3、YAP1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-kB、p-NF-kB、Vimentin、Elk1、p-Elk1、Caspase-3、p-S6、mTOR、p-mTOR、HER-2、PARP、PI3K、Merlin蛋白表達(dá)水平。5.使用p-ERK1/2特異性抑制劑U0126后,檢測各組細(xì)胞LUC7L3... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 LUC7L3 對惡性腦膜瘤細(xì)胞增殖與侵襲的影響。
    2.1 材料與方法
        2.1.1 惡性腦膜瘤細(xì)胞株的培養(yǎng)
        2.1.2 構(gòu)建沉默和過表達(dá)LUC7L3 基因慢病毒
        2.1.3 慢病毒包裝、濃縮、純化與滴度測定
        2.1.4 慢病毒感染
        2.1.5 q-PCR檢測惡性腦膜瘤細(xì)胞株LUC7L3 基因mRNA的表達(dá)情況
        2.1.6 Western blot檢測各組腦膜瘤細(xì)胞LUC7L3 蛋白表達(dá)情況
        2.1.7 CCK8 增殖實(shí)驗(yàn)
        2.1.8 平板克隆增殖實(shí)驗(yàn)
        2.1.9 EdU增殖實(shí)驗(yàn)
        2.1.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
        2.1.11 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測沉默和過表達(dá)LUC7L3 基因?qū)盒阅X膜瘤細(xì)胞遷移的影響
        2.1.12 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測沉默和過表達(dá)LUC7L3 基因?qū)盒阅X膜瘤細(xì)胞侵襲的影響
        2.1.13 數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 沉默與過表達(dá)LUC7L3 基因測序結(jié)果
        2.2.2 q-PCR檢查各組細(xì)胞LUC7L3 基因mRNA的表達(dá)情況
        2.2.3 Western blot檢查惡性腦膜瘤細(xì)胞LUC7L3 基因蛋白的表達(dá)情況
        2.2.4 沉默LUC7L3對IOMM-Lee細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
        2.2.5 CCK8 實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞生長曲線
        2.2.6 平板克隆測定LUC7L3 對惡性腦膜瘤細(xì)胞增殖活力的影響
        2.2.7 EdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞周期變化情況
        2.2.9 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測LUC7L3 對各組細(xì)胞遷移的影響
        2.2.10 Trasswell檢測LUC7L3在IOMM-Lee細(xì)胞侵襲中的作用
第3章 LUC7L3 影響腦膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞增殖和侵襲分子機(jī)制的探索
    3.1 材料與方法
        3.1.1 Westernblot檢測各組細(xì)胞中PI3K信號通路、MAPK信號通路、Hippo信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)水平
        3.1.2 Western blot檢測使用p-ERK抑制劑(U0126)后各組細(xì)胞LUC7L3、YAP1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-kB、p-NF-kB蛋白的表達(dá)水平
        3.1.3 數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 各組細(xì)胞中PI3K信號通路、MAPK信號通路、Hippo信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量
        3.2.2 使用p-ERK抑制劑(U0126)后各組細(xì)胞LUC7L3、YAP1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-kB、p-NF-kB蛋白表達(dá)量
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    1
        1.1 MAPK/Elk1 信號軸
        1.2 Elk1 與下游基因
        1.3 Elk1與miRNA、lncRNA
    2
        2.1 Elk1 與肝癌
        2.2 Elk1 與卵巢癌
        2.3 Elk1 與膀胱癌
        2.4 Elk1 與前列腺癌
        2.5 Elk1 與乳腺癌
        2.6 Elk1 與其他腫瘤
    3 總結(jié)與展望
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3190825