背景:腦卒中以高致死率和致殘率為主要特點(diǎn),是威脅人類的生命健康的主要因素之一。在腦卒中患者中絕大部分為缺血性腦卒中（Ischemic stroke,IS）,其占比達(dá)到了87%。IS是指由于血栓的形成或者是栓塞致使局部腦組織血液供應(yīng)不足,進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞缺血缺氧。由于大腦屬于高能耗器官,對(duì)于周圍環(huán)境變化比較敏感,隨著缺血缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生不可逆性損傷。目前,最有效的治療方法為溶栓療法,但溶栓療法治療不僅時(shí)間窗窄且伴隨著出血的風(fēng)險(xiǎn),所以,能夠通過溶栓療法進(jìn)行治療的受益人群有限。因此,探索IS發(fā)生發(fā)展機(jī)制,尋找更有效的治療靶點(diǎn)具有重要的臨床意義。細(xì)胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）是由細(xì)胞分泌的磷脂雙分子層包裹納米級(jí)囊泡樣結(jié)構(gòu)。除了在細(xì)胞相鄰細(xì)胞間傳遞信息外,最主要的功能特點(diǎn)是能夠穿過血腦屏障,進(jìn)而完成血液與中樞神經(jīng)組織之間的信息交流。EVs攜帶有供體細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸,當(dāng)被受體細(xì)胞攝取后,EVs中所有物質(zhì)釋放到受體細(xì)胞中,進(jìn)而將供體細(xì)胞的信息傳遞給受體細(xì)胞,并對(duì)受體細(xì)胞產(chǎn)生一定的調(diào)控作用。介于以上的功能特點(diǎn),近年來(lái)關(guān)于EVs在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：132 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 缺血性卒中傷研究進(jìn)展
    1.2 細(xì)胞外囊泡研究進(jìn)展
第2章 OGD損傷的PC12細(xì)胞通過其分泌的EVs誘導(dǎo)正常PC12細(xì)胞凋亡
    2.1 試劑與材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 PC12的處理
        2.2.2 PC12的凍存保種
        2.2.3 氧糖剝離模型的構(gòu)建
        2.2.4 CCK-8 測(cè)細(xì)胞的存活率
        2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)分析凋亡
        2.2.6 細(xì)胞外囊泡的分離
        2.2.7 細(xì)胞外囊泡形態(tài)學(xué)鑒定
        2.2.8 細(xì)胞外囊泡特異性標(biāo)記的鑒定
        2.2.9 OGD處理PC12細(xì)胞來(lái)源EVs誘導(dǎo)正常PC12細(xì)胞凋亡
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 PC12細(xì)胞OGD模型的建立
        2.3.2 EVs的分離鑒定
    2.4 討論
        2.4.1 PC12細(xì)胞OGD模型的建立
        2.4.2 OGD處理PC12細(xì)胞來(lái)源EVs的分離鑒定及功能分析
第3章 細(xì)胞外囊泡的蛋白質(zhì)組學(xué)分析
    3.1 試劑與材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 氧糖剝離模型的構(gòu)建
        3.2.2 細(xì)胞外囊泡的分離
        3.2.3 蛋白質(zhì)提取
        3.2.4 胰蛋白酶解
        3.2.5 TMT標(biāo)記
        3.2.6 HPLC分級(jí)
        3.2.7 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析
        3.2.8 數(shù)據(jù)庫(kù)搜索
        3.2.9 Gene Ontology分析
        3.2.10 亞細(xì)胞定位
        3.2.11 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域注釋
        3.2.12 蛋白質(zhì)功能富集
        3.2.13 基于蛋白功能富集的聚類分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 質(zhì)譜質(zhì)量檢測(cè)
        3.3.2 EVs蛋白質(zhì)組學(xué)分析總覽
        3.3.3 EVs蛋白質(zhì)組學(xué)重復(fù)性檢驗(yàn)
        3.3.4 Venn diagram分析差異表達(dá)蛋白的重疊情況
        3.3.5 差異表達(dá)蛋白的Gene Ontology二級(jí)注釋分類
        3.3.6 差異表達(dá)蛋白的亞細(xì)胞定位分析
        3.3.7 差異表達(dá)蛋白GO功能富集
        3.3.8 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域富集
        3.3.9 聚類分析
    3.4 討論
第4章 蛋白質(zhì)相互作用及PRM定量分析
    4.1 試劑與材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 氧糖剝離模型的構(gòu)建
        4.2.2 EVs的分離
        4.2.3 蛋白提取
        4.2.4 胰酶酶解
        4.2.5 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析
        4.2.6 數(shù)據(jù)處理
        4.2.7 蛋白質(zhì)相互作用分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論
第5章 結(jié)論
第6章 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cerebral ischemia and neuroregeneration[J]. Reggie H.C.Lee,Michelle H.H.Lee,Celeste Y.C.Wu,Alexandre Couto e Silva,Harlee E.Possoit,Tsung-Han Hsieh,Alireza Minagar,Hung Wen Lin.  Neural Regeneration Research. 2018(03)
[2]Molecular chaperones and hypoxic-ischemic encephalopathy[J]. Cong Hua,Wei-na Ju,Hang Jin,Xin Sun,Gang Zhao.  Neural Regeneration Research. 2017(01)



本文編號(hào)：3188032