目的:本研究旨在探索FoxM1/ADAM17對人腦膠質瘤細胞間質轉化的作用,探明Fox M1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路的活化機制,為腦膠質瘤的臨床診斷、治療提供新的策略。方法:（1）應用熒光定量PCR、Western blotting和免疫熒光分別檢測4種人腦膠質瘤細胞株中Fox M1、ADAM17、間質表型標志物（FN、N-ca、vimentin、YKL-40）、上皮表型標志物E-ca的mRNA、蛋白表達水平;（2）應用CCK8（Cell Counting Kit-8）法、平板細胞克隆形成實驗分別評價細胞增殖能力、克隆形成能力;（3）應用劃痕實驗和Transwell遷移實驗、成骨誘導和成脂誘導實驗分別檢測細胞的遷移能力、成骨、成脂分化潛能,評價人腦膠質瘤細胞間質轉化能力;（4）應用雙熒光素酶報告基因、點突變技術、染色質免疫共沉淀法（ChIP）探明FoxM1對ADAM17表達的轉錄調(diào)控機制;（5）用Western blotting、基因轉染等手段分析FoxM1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路中上下游分子的變化,探明Fox M1調(diào)控膠質瘤間質轉化的作用機制。結果:（1）SW1783... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 腦膠質瘤的分子分型及治療策略
        1.1.2 FoxM1在腦膠質瘤發(fā)生發(fā)展中的作用
        1.1.3 ADAM17在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中的作用
        1.1.4 EGFR/PI3K/AKT在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中的作用
    1.2 本研究的目的意義、內(nèi)容、技術路線
        1.2.1 目的意義
        1.2.2 研究內(nèi)容
        1.2.3 技術路線圖
第二章 FoxM1通過ADAM17促進膠質瘤細胞生長
    2.1 材料和試劑
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)及傳代：
        2.2.2 定量PCR
        2.2.3 Western blotting
        2.2.4 免疫熒光
        2.2.5 細胞轉染
        2.2.6 篩選穩(wěn)轉細胞
        2.2.7 CCK8
        2.2.8 克隆形成實驗
        2.2.9 構建含有FoxM1結合位點的ADAM17啟動子區(qū)域報告基因及其突變體
        2.2.10 染色質免疫共沉淀
        2.2.11 統(tǒng)計學分析
    2.3 結果
        2.3.1 FoxM1、ADAM17在人腦膠質瘤細胞中的表達
        2.3.2 FoxM1促進膠質瘤細胞生長
        2.3.3 ADAM17促進膠質瘤細胞生長
        2.3.4 FoxM1通過結合ADAM17啟動子促進了其表達
    2.4 討論
第三章 FoxM1/ADAM17途徑促進人腦膠質瘤細胞間質轉化
    3.1 材料和試劑
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)及傳代
        3.2.2 定量PCR
        3.2.3 Western blotting
        3.2.4 Transwell
        3.2.5 成骨誘導
        3.2.6 成脂誘導
        3.2.7 統(tǒng)計學分析
    3.3 結果
        3.3.1 人腦膠質瘤細胞中間質表型標志物與FoxM1、ADAM17的相關性
        3.3.2 不同膠質瘤細胞株遷移能力、成骨、成脂誘導分化潛能比較
        3.3.3 FoxM1促進膠質瘤細胞間質轉化
        3.3.4 FoxM1調(diào)控了膠質瘤細胞間質表型標志物的表達
        3.3.5 ADAM17促進膠質瘤細胞間質轉化
        3.3.6 ADAM17調(diào)控了膠質瘤細胞間質表型標志物的表達
        3.3.7 FoxM1通過ADAM17促進膠質瘤細胞間質轉化
    3.4 討論
第四章 FoxM1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路的活化機制
    4.1 材料和試劑
        4.1.1 主要材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)及傳代
        4.2.2 Western blotting
        4.2.3 統(tǒng)計學分析
    4.3 結果
        4.3.1 FoxM1調(diào)控了ADAM17/EGFR/AKT信號通路
        4.3.2 FoxM1通過ADAM17調(diào)控了EGFR/AKT信號通路
        4.3.3 ADAM17/EGFR/GSK3β 通路維持了FoxM1高表達
    4.4 討論
結論與展望
參考文獻
致謝
在校期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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[4]EGF和AG1478對GL15細胞增殖、侵襲和GFAP表達的影響[J]. 席桂發(fā),王寶峰,王和平,葉飛,郭東生,雷霆.  中華神經(jīng)外科疾病研究雜志. 2007(04)
[5]膠質瘤中EGFR擴增、過表達及其與腫瘤增殖關系的研究[J]. 董倫,浦佩玉,王虎,康春生,王廣秀.  中華神經(jīng)醫(yī)學雜志. 2005(12)

博士論文
[1]轉錄因子FOXM1在腫瘤細胞上皮間質轉化過程中的功能研究[D]. 楊潮.湖南大學 2013

碩士論文
[1]ADAM17在U87膠質瘤干細胞遷移和侵襲中的作用及機制[D]. 陳祥榮.南方醫(yī)科大學 2013
[2]PI3K抑制劑LY294002逆轉卵巢癌細胞紫杉醇化療耐藥以及對紡錘體檢測點蛋白Mad2表達的影響[D]. 周志剛.華中科技大學 2010



本文編號：3186217