目的探討NSC-34細胞轉染TDP-43-M337V后對細胞內(nèi)ROCK/PTEN信號通路的影響。方法1、細胞培養(yǎng):將空轉型、野生型和突變型三株NSC-34細胞系從液氮中分別取出,接種于2520cm2玻璃培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5%CO2條件的培養(yǎng)箱內(nèi)進行復蘇、培養(yǎng)和傳代。2、利用免疫組化方法來觀察轉染細胞的形態(tài)變化;3、細胞氧化損傷的程度通過檢測細胞內(nèi)丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量來反應;4、通過MTT檢測轉染基因對NSC-34細胞活性的影響;5、通過應用Western20blots法來檢測各組細胞中ROCK/PTEN信號通路下游相關分子在蛋白水平上的表達差異;6、通過ROCK活性檢測試劑盒來檢測ROCK活性,以觀察在該信號通路中ROCK活性的變化。結果1、轉染p20DEST30-EGFP-TDP-43-M337V質粒的細胞與轉染p20DEST30-EGFPTDP-43-wt和p20DEST30-EGFP質粒組細胞相比,胞體變圓,突起減少,且軸突變短;經(jīng)過細胞內(nèi)MDA含量檢測發(fā)現(xiàn),突變的細胞內(nèi)MDA含量明顯高于其它兩組細胞（P<0.05）;同時,經(jīng)過MTT檢... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
引言
第一章 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗細胞
        1.1.2 主要試劑/試劑盒
        1.1.3 主要儀器、設備及耗材
        1.1.4 培養(yǎng)基及主要緩沖液的配制
        1.1.5 Western blotting所需溶液的配制
        1.1.6 免疫組化試劑的配制
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代和凍存
        1.2.2 細胞免疫組化
        1.2.3 MDA測定
        1.2.4 MTT測定
        1.2.5 Western blotting
        1.2.6 ROCK活性檢測
    1.3 統(tǒng)計分析
第二章 結果
    2.1 細胞形態(tài)的變化
    2.2 細胞內(nèi)脂質過氧化水平的檢測
    2.3 MTT檢測轉染基因對NSC-34細胞活性的影響
    2.4 轉染pDEST30-EGFP-TDP43M337V質 粒對NSC-34細 胞內(nèi)ROCK及ROCK/PTEN通路下游效應因子蛋白表達水平的影響
    2.5 ROCK活性測定檢測轉染pDEST30-EGFP-TDP43M337V質粒的NSC-34細胞對ROCK活性的影響
第三章 討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
致謝



本文編號：3178586