目的探討NSC-34細(xì)胞轉(zhuǎn)染TDP-43-M337V后對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROCK/PTEN信號(hào)通路的影響。方法1、細(xì)胞培養(yǎng):將空轉(zhuǎn)型、野生型和突變型三株NSC-34細(xì)胞系從液氮中分別取出,接種于2520cm2玻璃培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5%CO2條件的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行復(fù)蘇、培養(yǎng)和傳代。2、利用免疫組化方法來觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞的形態(tài)變化;3、細(xì)胞氧化損傷的程度通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量來反應(yīng);4、通過MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染基因?qū)SC-34細(xì)胞活性的影響;5、通過應(yīng)用Western20blots法來檢測(cè)各組細(xì)胞中ROCK/PTEN信號(hào)通路下游相關(guān)分子在蛋白水平上的表達(dá)差異;6、通過ROCK活性檢測(cè)試劑盒來檢測(cè)ROCK活性,以觀察在該信號(hào)通路中ROCK活性的變化。結(jié)果1、轉(zhuǎn)染p20DEST30-EGFP-TDP-43-M337V質(zhì)粒的細(xì)胞與轉(zhuǎn)染p20DEST30-EGFPTDP-43-wt和p20DEST30-EGFP質(zhì)粒組細(xì)胞相比,胞體變圓,突起減少,且軸突變短;經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)MDA含量檢測(cè)發(fā)現(xiàn),突變的細(xì)胞內(nèi)MDA含量明顯高于其它兩組細(xì)胞（P<0.05）;同時(shí),經(jīng)過MTT檢... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
引言
第一章 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.1.2 主要試劑/試劑盒
        1.1.3 主要儀器、設(shè)備及耗材
        1.1.4 培養(yǎng)基及主要緩沖液的配制
        1.1.5 Western blotting所需溶液的配制
        1.1.6 免疫組化試劑的配制
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代和凍存
        1.2.2 細(xì)胞免疫組化
        1.2.3 MDA測(cè)定
        1.2.4 MTT測(cè)定
        1.2.5 Western blotting
        1.2.6 ROCK活性檢測(cè)
    1.3 統(tǒng)計(jì)分析
第二章 結(jié)果
    2.1 細(xì)胞形態(tài)的變化
    2.2 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平的檢測(cè)
    2.3 MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染基因?qū)SC-34細(xì)胞活性的影響
    2.4 轉(zhuǎn)染pDEST30-EGFP-TDP43M337V質(zhì) 粒對(duì)NSC-34細(xì) 胞內(nèi)ROCK及ROCK/PTEN通路下游效應(yīng)因子蛋白表達(dá)水平的影響
    2.5 ROCK活性測(cè)定檢測(cè)轉(zhuǎn)染pDEST30-EGFP-TDP43M337V質(zhì)粒的NSC-34細(xì)胞對(duì)ROCK活性的影響
第三章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3178586