目的探討帕金森病致病基因Parkin與突觸相關(guān)蛋白synaptojanin1（SYJ-1）的關(guān)系。方法選擇雄性8周齡野生型C57B/L小鼠5只,獲取腦組織裂解物,分為陽(yáng)性對(duì)照組、抗Parkin抗體組、抗SYJ-1抗體組和陰性對(duì)照組,陽(yáng)性對(duì)照組不加任何抗體,后3組分別加入抗Parkin抗體、抗SYJ-1抗體、無(wú)效抗體處理,檢測(cè)Parkin和SYJ-145表達(dá)。選擇人胚腎細(xì)胞系（HEK-293T）細(xì)胞進(jìn)行結(jié)構(gòu)域鑒定實(shí)驗(yàn),用免疫沉淀反應(yīng)檢測(cè)Parkin與SYJ-1共沉淀。檢測(cè)構(gòu)建Parkin不同結(jié)構(gòu)域截短突變質(zhì)粒。Pakrin對(duì)SYJ-1泛素化降解實(shí)驗(yàn)中,將HEK-293T細(xì)胞分為6組（n=5）轉(zhuǎn)染:綠色熒光蛋白（GFP）-SYJ-145+HA-UB質(zhì)粒組（A組）、GFP-SYJ-145+Flag-Parkin組（B組）、GFP-SYJ-145+HA-UB+Flag-Parkin質(zhì)粒組（C組）、MG132處理的GFP-SYJ-145+HA-UB+MG132質(zhì)粒組（D組）、GFP-SYJ-145+Flag-Parkin+MG132質(zhì)粒組（E組）和GFP-SYJ-145+HA-UB+Flag-P... 

【文章來(lái)源】：中華老年心腦血管病雜志. 2020,22(09)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組
        1.1.2 細(xì)胞系和主要試劑
    1.2 小鼠腦組織蛋白免疫共沉淀
    1.3 Parkin不同片段缺失突變質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.4 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
    1.5 Western blot檢測(cè)
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié) 果
    2.1 小鼠腦組織內(nèi)Parkin與SYJ-1相互作用
    2.2 Parkin不同結(jié)構(gòu)域截短突變質(zhì)粒
    2.3 Parkin與SYJ-1相互作用結(jié)構(gòu)域的鑒定
    2.4 Parkin促進(jìn)SYJ-1的泛素化降解
3 討 論



本文編號(hào)：3169685